第4章 胚胎培养课件.ppt

胚胎培养;主要内容;含义;胚电镜扫描图片;第一节 胚培养;一、培养类型;分裂一次;; 2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养 ⑵幼胚培养;幼胚培养（子叶形成之前） 成熟胚培养 （子叶形成以后） ;; （1）子房表面消毒后，在无菌条件和高倍解剖镜下切取完整胚，然后接种。 ;适宜时间摘取子房;（2）幼胚培养的发育途径;①按正常胚胎发育途径形成植株;② 胚“ 早熟萌发”;③脱分化形成愈伤组织;;;成熟胚是自养的，培养基需要简单。 未成熟的幼胚，当它在胚囊里生长时，不仅依赖于周围细胞中的代谢，而且依赖于周围胚乳消耗的养料。与成熟胚的相对自养性比较，幼胚则完全是异养的，在离体情况下，要求更复杂的培养基。除了一般的无机盐成分外，还要加入微量元素和各种生长辅助物质。胚龄越小，要求的培养基成分就越复杂。; 胚龄;1. 培养基：; 幼胚需高无机盐、高AA、高蔗糖、高渗透压。 液体培养基利于幼胚培养，固体培养基利于成熟胚培养。;2.培养条件：;原胚(幼胚)的培养的条件;3 . 有利幼胚培养的因素 胚乳看护培养，利于原胚的生长有明显的促进作用。 胚柄的存在对于幼胚的存活至关重要： 胚柄促进生长的活性，心形早期活性最高。而且保留胚柄减少对胚的直接损失。;应用;;第二节胚乳培养;将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 ;胚乳培养再生植株证明了全能性理论； 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； 可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统。; 胚乳愈伤组织的建立 绝大多数经历愈伤组织阶段（器官发生），极少数直接从胚乳直接分化器官(胚状体)。 胚乳发育时期 发育早期的胚乳，接种不方便，愈伤组织的诱导频率很低。 处于旺盛生长期的胚乳，离体条件下最易诱导产生愈伤组织。 接近成熟或完全成熟的胚乳，愈伤组织诱导频率很低。 ;★ 旺盛期胚乳特征 §胚已分化完成 §胚乳已形成细胞组织 §充分生长，达到成熟大小 §外观为半透明的固体状 §富有弹性;水稻：授粉后4 d 黑麦草：授粉后8 ~ 10 d 黄瓜：授粉后7 ~ 16 d 梨：授粉后20 d 大麦：授粉后10 ~ 20 d 玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d;（一）培养基及植物生长物质 WT、MS＋植物激素 生长素＋细胞分裂素合理搭配，效果更好 一般植物 均适宜 特殊种类激素 如: 大麦＋2,4-D 猕猴桃＋玉米素 无特别要求，任何一种生长素均可 如:枣; 旺盛期的未成熟胚乳，在诱导培养基上无需原位胚的参与，就能形成愈伤组织。 完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前，必须借助于原位胚的萌发，使其活化。 胚在萌发时产生某种物质“ 胚因子”。外源GA3能部分取代胚因子。 ;（三） 培养方法： A、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长出白色的不定根;胚乳培养过程;（四）胚乳培养的应用 培养胚乳的首要目的是为了直接获得三倍体植株。 三倍体——六倍体——生产 倍性多样性——筛选非整倍体植株 杂种胚乳—附加系和换代系—遗传育种 ;第三节胚珠和子房培养 ;未受精胚珠;一、胚珠培养;不同植物的胚珠形态结构;胚珠培养的方法;二、子房培养;3.接种： 无菌条件下剥开幼花，夹出子房并接种于培养基（MS、N6等）。 4.培养： T26℃,RH50-60%，16h散射光。;胚珠;三、胚珠和子房培养的应用 1、胚珠 受精胚珠培养目的——打破种子的休眠 挽救胚的发育以获得杂交种 未受精胚珠培养目的——获得单倍体细胞发育而来 的植株 2、子房 授粉子房培养目的——挽救子房内杂种胚的发育 未授粉子房培养目的——获得单倍体植株 试管受精解决杂交育种中不 亲和问题。;第四节 其它生殖器官培养一、花器培养;3.接种： 花蕾培养