植物组织培养设备及条件课件.ppt

第二章 实验室设计和培养条件;第一节 实验室设计及基本技术; 组织培养实验室布局的总体要求 便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察;基本实验室;;准备室;缓 冲 室;无 菌 室;无 菌 室;培 养 室;培养架;培养间;二、仪器设备;冰箱;天平;培养基分装器;摇 床; 2）、灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。;蒸汽压力灭菌锅;高 压 灭 菌 器;干热消毒柜;75%酒精喷雾器;3）、无菌操作设备 ;二、设备、仪器;1.紫外线灭菌灯 2.日光灯 3.工作台 4.凳子 5.搁物架 6.窗 7.推拉门 8.缓冲间;无菌接种箱;4、细胞培养设备 ;培养架;HZC-250恒温振荡培养箱 ; 光照培养箱;5、细胞学鉴定设备 光学显微镜、体视显微镜、倒置显微镜;电子天平 （0.0001g， 0.001g???;1、玻璃器皿;2、金属材质用具;（二）各类器皿 1．器皿的类型 （1）培养器皿 三角瓶、培养瓶、圆形培养瓶、试管、L形管和T形管 （2）分注器 （3）刻度移液管 （4）微量移液器 （5）细菌过滤器;四、洗涤技术;2、塑料用品洗涤;3、金属用品洗涤;五、灭菌技术;2、灭菌;饱和蒸汽压力与其对应的温度;（3）塑料器皿灭菌： 多采用高压蒸汽消毒灭菌 （4）金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用;（5）接种室灭菌;（6）外植体灭菌;常用消毒剂消毒灭菌比较表;消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。 打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。 开启过滤风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。 用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。;; 植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的，要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 准备室：器具的洗涤、干燥、保存、灭菌，各种药品的储备、称量、溶解、配制、培养基分装等，设备：药品柜、防尘厨、冰箱、天平、纯水仪、酸度计、操作台、灭菌锅、烘箱。 实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。化学室/准备室、接种室、培养室。; 接种室：植物材料的消毒、接种、培养物转移、试管苗继代、原生质体制备及其它需要进行的无菌操作。设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、接种针）。清洁和消毒，减少与外界空气对流，穿实验服及换鞋以减少带入杂菌。 培养室：墙壁要求绝热防火的性能，培养架由金属制成，底层离地高约10cm，层间隔40cm，总高1.7m左右，长度根据日光灯的长度而设计，宽度为60cm。;第二节 植物组织培养所需的环境 条件及营养成分;温度 光照 湿度 气体 渗透压 pH值;温度在20-27℃左右，空调控温，湿度恒定，相对湿度在70-80%，光照由定时开关控制，每天光照10-16h左右，不同植物决定光照时间，培养室可采用太阳光为能源，易成活，阴雨天用室内灯光补光。;二、营养成分;Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准:; 国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种： C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni） 在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。;根据植物体内含量多少，可把这些元素分为 ※大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种 ※微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下，有的只含0.1mg/kg， Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种;1、大量元素 N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置。 P是磷脂的主要成分。培养基中常用KH2PO4 、NaH2PO4等。 K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。;Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用； S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。 Ca是构成细胞壁的