猪传染性胃肠炎病毒S基因在昆虫细胞中的表达.PDFVIP

　 ２０１５，４９（３）：７～１１／ 武 岳，等 中国兽药杂志 ·７ · 猪传染性胃肠炎病毒 Ｓ基因在昆虫细胞中的表达 １ １ ２ １，２∗ 武 岳 ，周金龙 ，张超林 ，张许科 （１．河南农业大学牧医工程学院，郑州４５０００２；２．国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳４７１００３） ＋ － － － － － ［收稿日期］２０１４ １２ ２５　 ［文献标识码］Ａ　 ［文章编号］１００２ １２８０ （２０１５）０３ ０００７ ０５　 ［中图分类号］Ｓ８５２．６５ ９．６ ［摘　 要］　 为获得具有天然活性的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）重组Ｓ蛋白，制备针对猪传染性胃 肠炎Ｓ蛋白Ａ、Ｄ抗原位点的单克隆抗体及建立快速抗体检测方法，本研究将ＴＧＥＶ Ｓ基因Ａ、Ｄ抗 － 原位点经ＰＣＲ扩增并克隆入ｐＦａｓｔＢａｃＨＢＭ ＴＯＰＯ载体，经转座、转染后获得重组杆状病毒，并对重 组杆状病毒进行间接免疫荧光（ＩＦＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析，结果显示，ＴＧＥＶ Ｓ基因Ａ、Ｄ抗原位点在 杆状病毒中成功表达，其表达产物为ＴＧＥ诊断试剂的制备、基因工程疫苗的研制奠定了基础。 ［关键词］　 猪传染性胃肠炎病毒；Ｓ基因；杆状病毒表达 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｐｉｋｅ Ｇｅｎｅ ｏｆ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌｓ １ １ ２ １，２∗ － － － ＷＵ Ｙｕｅ ，ＺＨＯＵＪｉｎ ｌｏｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈａｏ ｌｉｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｘｕ ｋｅ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，４５０００２，Ｃｈｉｎａ； ２．ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌｕｏｙａｎｇ，Ｈｅｎａｎ４７１００３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ （ＴＧＥＶ），ｐｒｅｐａｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ Ａ ａｎｄ Ｄａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｓｉｔｅｓｏｆ Ｓｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｒａｐｉｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ，Ａ ａｎｄ Ｄ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｓｉｔｅｓ ｏｆ Ｓ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ － ｐＦａｓｔＢａｃＨＢＭ ＴＯＰＯ ｖｅｃｔｏｒ， ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ （ＩＦＡ） ａｎｄ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ