细菌类生物农药课件.ppt

RAPD (random amplified polymorphic DNA ) 由Williams等于1990年创立。其基本原理与PCR技术一致。 PCR(Polymerase?chain?reaction? )技术是一种体外快速扩增特异基因或DNA序列的方法，由Mullis等于1985年首创。 补充2： 苏云金杆菌其他杀虫蛋白 迄今,苏云金芽胞杆菌已发现有十几种生物活性成分 ，如辅助蛋白可以有利于提高晶体蛋白的杀虫活性。 如双效菌素(zwitternicinA)除具有增效苏云金芽胞杆菌的杀虫活性外,还具有抑制疫霉和腐霉的生长作用,可用于防治植物病原菌病害的目的 存在于苏云金芽胞杆菌细胞内的自身诱导物抑制蛋白(autoinducerinhibitor ）可以抑制植物病原菌细胞间信息传递的关键分子 ，达到降低病原菌毒素基因表达的水平,避免植物致病的产生 几丁质酶 VIP蛋白（(vegetative insecticidial protein） 营养期杀虫蛋白已被视为苏云金芽胞杆菌的第二代杀虫蛋白.但目前对营养期杀虫蛋白的了解还远不及杀虫晶体蛋白。 蛋白的杀虫活性高Vip3A对小地老虎毒杀力比cry1A高260倍，对具有（杀虫晶体蛋白）抗性的昆虫有很好的疗效。 杀虫基因的应用 1 多基因－复合杀虫蛋白基因工程菌的构建 2 转基因植物的构建 苏云金杆菌发酵工艺 1. 发酵工艺一般流程 原料 →灭菌 →微生物培养→浓缩→晶体蛋白的分离→活性测定 菌种 2.发酵培养基： 豆饼粉2.5, 淀粉2.0, 酵母粉2.0, 玉米浆2.0, 添加剂Ⅰ号0.1, 葡萄糖1.0, KH2PO40.3, CaCO30.1, CaCl20.05, MgCl20.01, CuCl20.005, ZnSO40.002, CoCO30.005 3. 培养条件 温度：28-30，通气量：1:0.5~11 第二讲 细菌类生物农药 一、细菌与昆虫的细菌性病害 细菌属原核生物界细菌门 原核生物的特点： 1. 拟核由双链DNA构成，也是基因载体，染色体没有结合蛋白。 2. 没有复杂折叠、分割成不同原生质单元的膜系统 3. 70S的核蛋白体分布于细胞之中， 原核与真核细胞的区别 附：古细菌（archaebacteria） 具有原核生物的某些特征，无核膜及内膜系统； 也有真核生物的特征，甲硫氨酸起始蛋白质的合成、核糖体对氯霉素不敏感、RNA聚合酶和真核细胞的相似、DNA具有内含子并结合组蛋白。 此外，细胞膜中的脂类是不可皂化的，细胞壁不含肽聚糖。 生活在极端环境中，如：产甲烷菌、极端嗜盐菌、嗜热嗜酸菌。 二、细菌性感染昆虫后的症状 特点：昆虫活动力降低、食欲减退、口腔和肛门周围有排泄物 病原侵入后导致败血症；虫体死亡后，颜色加深，迅速变为褐色或黑色，部分虫体软化腐烂。 死后虫体一般都有臭味 链球菌科（Streptococcaceae）链球菌属（Streptococus）微球菌属（Micrococus） 立克次氏体（Rickettisaceae） 沃尔巴立克次氏体属（Woerbachia） 立克次氏小体属（Rickettisella） 枝（支）原体目（Mycoplasmatales） 螺属支原体（Spiroplasma） 3 杀虫细菌报道的种类 芽孢杆菌属： (1)苏云金杆菌（B. thuringiensis） 1901日本石渡首次分离，定义为猝倒杆菌， 1911年Beliner从德国的苏云金地区的地中海粉斑螟中分离得到产伴胞晶体的芽孢杆菌。 1938年第一个生物农药制剂 1953年人们认识到伴胞晶体的功能，之后是β毒素 (2) 苏云金杆菌的分类 根据鞭毛抗原(H)，整体抗原（O抗原），将苏云金杆菌分为70个血清型，80个变种 有些菌如140，CT-43等无鞭毛，故无H抗原，则用O抗原鉴定。新H型培养体邮寄到Bt国际咨询中心H.de Barjac博士(法国)，由她建议新H型编号。她自1961年即为巴斯德研究所昆虫病原细菌领导人，该中心亦是WHO昆虫病原细菌参考中心，目前保存有3500株芽孢杆菌，由于在Bt血清鉴定及Bti分离鉴定等方面作出突出贡献， 我国分离了近26个亚种，近20个血清型 命名 苏云金芽胞杆菌新亚种的命名主要是根据以下四条: (1) 采集地: 如苏云金亚种、肯尼亚亚种、加拿大亚种、以色列亚种、九州亚种、东北亚种(九州和东北为日本省名)、云南亚种、武汉亚种、华中亚种、山东亚种等。 (2) 根据寄主虫名。如蜡螟亚种、玉米螟亚种、松毛虫亚种等。 (3) 根据分离者