发酵2项目二：培养基灭菌课件.ppt

项目二 培养基及设备灭菌; 2006年8月15日,国家食品药品监督管理局召开新闻发布会，通报了对安徽华源生物药业有限公司生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液（欣弗）引发的药品不良事件调查结果：现已查明，安徽华源生物药业有限公司违反规定生产，是导致这起不良事件的主要原因。经查，该公司2006年6月至7月生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批准的工艺参数灭菌，降低灭菌温度，缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果。经中国药品生物制品检定所对相关样品进行检验，结果表明，无菌检查和热源检查不符合规定。 由此可见，当前无论是食品、药品或生物产品，在生产过程都要重视灭菌和消毒工作，确保安全。 ;概 述;生产菌和杂菌同时在培养基中生长，结果丧失了生产能力。 杂菌的生长速度有时比生产菌生长得快，结果使反应器中以杂菌为主。 杂菌会污染最终产品。 杂菌所产生的物质，使提取产物时发生困难。 杂菌降解所需要的产物。 发酵如污染了噬菌体，可使生产菌株发生溶菌现象。;物理灭菌 热力灭菌（如干热灭菌、湿热灭菌、流通蒸汽灭菌）、射线灭菌、超声波消毒和微波消毒等。 化学灭菌 液体灭菌（如75%乙醇、1%聚维酮碘溶液、0.1%～0.2%新洁尔灭、2%左右的酚或煤酚皂溶液）和气体灭菌（如臭氧、环氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和过氧乙酸蒸汽等）。 ;干热灭菌：是指相对湿度在20％以下的高热，有火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 湿热灭菌：又成为高压蒸汽灭菌。在实验室或工业生产中，对于培养基、管道、设备的灭菌，通常采用蒸汽加热到一定的温度，并保温一段时间的灭菌方法，称之为湿热灭菌。 ;火焰灼烧灭菌。火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 热空气灭菌。利用高温干燥空气（160－170 ℃ ）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。; 原理：蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。 效果比同温度下干热好。;通常用紫外线、高能量的电磁波等 原理：紫外线波长在260nm杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收，可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。;缺点：穿透力不大。距照射物1.2m为宜。 应用：无菌室，医院。 注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用 射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆积物品的灭菌。 ; 利用频率在20～200kHz的声波作用下，使细菌细胞机械破裂和原生质迅速游离，达到消毒目的。如超声洗手器，用于手的消毒。超声洗涤机，用于注射器的清洁和初步的消毒处理。;微波消毒利用微波的就是一种高频电磁波，其杀菌的作用原理，一为热效应，所及之处产生分子内部剧烈运动，使物体里外湿度迅速升高；一为综合效应，诸如化学效应、电磁共振效应和场致力效应。 目前已广泛应用于食品、药品的消毒，用微波灭菌手术器械包、微生物实验室用品等亦有报告。;原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。 注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境有关。 常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等; 0.%~0.25%KMnO4溶液、0.5%~1%漂白粉溶液、75%酒精、0.25%新洁尔灭、10%甲醛溶液、苯酚溶液、来苏尔;化学物质名称;是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。 工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 工业上培养基灭菌使用的方法是湿热灭菌。湿热灭菌简便、有效、经济。 达到要求的无菌程度（N=10-3）即灭菌1000次，有一次是失败的，残留了一个活菌体。要求灭菌后达到绝对无菌是很难做到的，也是不必要的。因此在工程设计中常取N=10-3。这是工业上对培养基要求达到无菌程度标准。;对数残留定律：在灭菌过程中，微生物在高温高湿的环境中的热死亡速率与任一瞬间残存的活菌数成正比。 热死动力学方程 - dN/dt = KN N--残存的活菌数（个） t--灭菌时间（min） K--杀菌速率常数（min-1）或叫死亡速率常数。 K是判断微生物受热死亡难易程度的基本依据。 dN/dt--菌的瞬时变化率，即死亡速率。; 将方程积分后得：t =2.303/K lgN0/Ns N0=开始灭菌(t=0) 时原有活菌数 Ns=经时间t后残存活菌数 反应速度常数k值是微生物耐热性的一种特征，它随微生物的种类和灭菌温度而异。;K