手性药物高效液相色谱拆分课件.pptVIP

* 手性药物高效液相拆分法 手性药物的高效液相色谱拆分方法包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱、超临界流体色谱和电泳在内的几乎所有色谱和准色谱手段都已应用于对映体拆分。一般分为间接法与直接法。 直接法 手性试剂衍生化法 ( CD F) 间接法 手性固定相( C S P ) 拆分法 手性流动相( C M P ) 拆分法 手性固定相是由担体键合高光学纯度的手性异构体制作 而成，检测物在手性固定相表面形成非对映体对，根据其稳 定常数不同而获得分离。 用于色谱分离的手性固定相已经被大量研究，已有100多 种液相色谱固定相被商业化。目前所研究的高效液相色谱手 性固定相有 7大类。 其中主要应用的有：Pirkle型CSP、环糊精CSP、多糖类 CSP、蛋白质CSP 。 手性固定相( C S P ) 拆分法 CSP种类 作用机理 应用 Pirkle型 CSP 通过含末端羧基或异氰酸酯基手 性前体与氨基键合硅胶进行缩合反 应， 分别形成含酰胺或脲型结构CSP 氨基酸、 乙内酰脲、 内酰脲、 胺类、 醇类及硫醇类药物对映体 拆分 环糊精CSP 环糊精的手性识别主要来自环内腔 对芳烃或脂 肪烃类侧链的包容作 用， 以及环外壳上的羟基与药物对 映体分子发生氢键作用 β一环糊精：适用于大多数药物 α一环糊精：适用于相对分子质 量小于200的药物 γ一环糊精：适用于较大相对分 子质量药物 多糖类CSP 主要来自氨基甲酸酯或酯的部位与 被拆分物之间形成氢键或偶极 ～偶 极作用， 或通过被拆分物分子进入 纤维索网状腔， 导致腔内立体环境 的改变而实现 主要用于分离巴比妥类药物、 麻醉药和抗抑郁药等 蛋白质CSP 可识别药物对映体在蛋白质的结合 位点而达到手性分离 可直接分离许多药物，如硫喷 妥因、 心得怡及阻滞剂等 手性流动相( C M P ) 拆分法 又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加 入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常 数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不 同来进行分离。 优点：此法不需昂贵的手性柱，亦无须进行柱 前衍生，手性添加剂可视要求而更换，使用比较方 便。 其中主要应用的有：配体交换型手性添加剂、环糊精添加剂、手性离子对添加剂。 手性试剂衍生化法 ( CD F) 该法是药物对映体在分离前与高光学纯度衍生化试剂( C D A) 反应， 形成非对映体， 再进行色谱分离测定。 该法要求手性试剂及反应产物在化学性质上和手性上很稳定，在反应及色谱条件下，试剂、手性药物和反应产物不发生消旋化反应。手性试剂应具有紫外或荧光吸收等敏感结构， 使生成物具有良好的可检测性。 一些手性衍生化试剂和应用 优点：可使用已有的非手性同定相， 花费少，通过选用具有 强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂， 可提高检测敏感度， 而 且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。 局限性：是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生 化速率及平衡常数应一致， 要求衍生化反应迅速、 彻底， 否 则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化， 外消旋药物需要有可被衍生化的基团， 此外衍生化法步骤较烦 琐， 衍生化试剂 绝大多数毒性相当大， 而且该方法难以实现 分析的自动化。 CD F法优缺点 色谱柱： 2 5 0× 4 .6 m m i .d ，(制备醋酸纤维素酯类液相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面)， 采用湿法自行装柱。 色谱条件：以正己烷 一异丙醇的混合溶液( 体积比为9： 1 ) 作流动相， 流速为 0 . 5 mL ／ m i n ，柱温3 0 ℃ ,紫外检测波长为2 5 4 n m。 柱性能评价：用流动相冲洗该色谱柱， 直到基线稳定． 以 1 ， 3 ， 5——叔 丁基苯测定死时间， 以苯测其理论塔板数为 2 2 9 6 9 m—1 。 扑尔敏的拆分 药物扑尔敏溶解在流动相溶剂中， 配制的浓度为3 .2 mg／mL 。 扑尔敏的结构示意图1所示。 在上述色谱条件下，分别以0 . 4和0 .5uL的进样量进样分析 结果表明： 此柱在分离药物扑尔敏时，随着进样量的增大，此柱有些过载，分离效果不佳。一般来说，在分离物进样过载的情况下，样品的分离效果较差，随着进样量的降低，样品的分离更充分。 这是因为手性分离是 一个吸附和分配的过程， 在进样量过载的情况下， 没