培训幻灯片：菌落总数的测定GB4789.2-2010-.pptVIP

; 平板计数法; 一、定义;a 在GB4789.2-2010的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长的嗜中温需氧或兼性厌氧菌的菌落总数。 b 按国家标准方法规定，即在需氧情况下， 36 ±1℃培养48±2 h，能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。;C 菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，只包括一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以有时被称为杂菌数、需氧菌数等。 ; 4 菌落总数测定的卫生学意义 食品本身的新鲜程度 加工储存运输过程中是否受到污染—卫生质量 卫生学指标：必须配合大肠菌群的检验和其他病原菌项目的检验，才能做出比较全面准确的评定。 ---菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 --食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。 ;二、试验材料;三、试验流程 ; 菌落总数的检验程序图; 四、??试验步骤 ;1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 常见做法：以无菌操作取检样25g（mL），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或均质袋内，经充分振荡或拍击制成1:10的均匀稀释液。 ;1.3、用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，沿管壁徐徐注入含有9 mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使之混合均匀，制成1:100的稀释液。 1.4 按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。 ;1.5、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个???宜稀释度（液体样品可包括原液），分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 同时分别取1ml空白稀释液（不含样品），加入两个灭菌平皿内作空白对照。 1.6、稀释液移入平皿后，及时将冷却至46℃平板计数琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动平皿，使其混合均匀。 ;（二）培养;（三）?菌落记数 菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，cfu）表示。 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器检查，以防遗漏。 记录稀释倍数和相应的菌落数量。 到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。 ;计数规则 1 选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 低于30cfu的平板记录具体菌落数； 大于300cfu的可记录为多不可计； 每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 ;计数规则2： 有较大片状菌落生长的平板，不宜采用，应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数； 若片状菌落不到平板的一半，而另一半平板菌落分布又很均匀，则可以计算分布均匀的半个平板上的菌落数，再乘以2，以代表一个平板的菌落数。;计数规则3： 当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计。 注意：如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。 ; ;1.2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按下列公式计算： N = ∑C / [n1 + (0.1 × n2) ] × (d) N ： 样品中菌落数 ∑C ：含适宜范围CFU的平板菌落数之和 n1：适宜范围菌落数的第一稀释度（低稀释度）平板个数 n2：适宜范围菌落数的第二稀释度（高稀释度）平板个数 d： 第一稀释度（低稀释度） 公式使用的前提：有两个连续稀释度在适宜计数范围内（30～300个菌落数） ;菌落总数计算公式的改变;计算范例1;计算范例2;1.3、?若所有稀释度的平板菌落数均300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可以记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 即：所有平板菌落数均300，则计最高稀释度平板的菌落数 ;1.4、若所有稀释度平板菌落数均3