4789.4沙门菌检验课件.pptVIP

分离培养中的注意要点 非典型的沙门氏菌菌落形态：不存在典型的或可疑的沙门氏菌菌落时，按如下步骤检验非典型的沙门氏菌菌落。 HE和XLD琼脂：非典型的沙门氏菌在HE和XLD琼脂上呈黄色菌落，带或不带黑色中心。HE和XLD平板经24±2小时培养后，没有典型的沙门氏菌菌落，则挑取2个或更多个非典型的沙门氏菌菌落。 BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落，其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平板培养24±2小时后，没有出现典型菌落，则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个非典型的菌落。 沙门菌显色培养基 沙门菌显色培养基主要用于快速筛选、分离沙门菌。其基本原理：利用沙门菌特异性酶与显色基团的特有反应，使色原游离出来，沙门菌在培养基上呈紫色或紫红色。而大肠杆菌等其他肠道杆菌呈蓝绿色。 色原-特定结合物 色原＋特定结合物 沙门菌辛酸脂酶 无色 显色 游离 可疑菌落的生化鉴定 自选择性琼脂平板（至少2种选择性平板）上直接挑取2个以上可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂(TSI)。 TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亚铁铵、硫代硫酸钠、酚红、琼脂。 在TSI琼脂中有2个指示剂体系： --酚红:在碱性环境中呈红色；在酸性环境中呈黄色。 --硫酸亚铁铵：是硫化氢的指示剂，可与硫化氢反应生成硫化铁呈黑色。硫代硫酸钠可防止硫化氢氧化形成S-S基而影响反应。 沙门菌在TSI琼脂上的反应 斜面 底层 产气 H2S 可能的菌属和种 – + +/– + 沙门菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌 + + +/– + 沙门菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌 – + – – 伤寒沙门菌、鸡沙门菌、志贺菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 – + + – 沙门菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 + – + – +/– – – – 非沙门菌 GB 4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验 沙门菌概况 沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门菌属。 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。我国自1911年至90年代初已有255个血清型。 虽然沙门菌的血清型很多，但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。 分类： 伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。 非伤寒沙门菌-食品卫生标准的检测的主要对象。 沙门菌的生物学特性 形态与染色性： 革兰氏阴性杆菌，无芽胞,一般无荚膜。 除鸡瘟沙门菌（S.pullorum)和鸡沙门菌(S.gallinarum)外均有动力。为周身鞭毛，并多数有菌毛。 大小：1~3um×0.5~1um。 营养需求不高，需氧或兼性厌氧。普通营养培养基上均能生长，能够利用柠檬酸盐作为碳源。 在普通肠道选择性平板上基本上形成无色菌落。菌落中等大小，半透明，表面光滑，边缘整齐或呈锯齿状。 不分解乳糖，大部分菌株产H2S，发酵葡萄糖产酸不产气。 培养与生化特性 沙门菌的分布 沙门菌广泛存在于自然环境中。 通过沙门菌病患者或健康带菌的人和动物的排泄物污染环境和食品。 易于污染的高危食物：畜禽肉类、蛋、奶及其制品。 沙门菌在肉类中不分解蛋白质，不产生靛基质，所以当食品污染了沙门菌后，通常没有感官性状的改变。 沙门氏菌检验程序 目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态， 不需要均质，振荡混匀。 如使用均质袋，可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h～18h。 前增菌 无菌均质袋 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或