产生杂交瘤细胞-于都中学.PPTVIP

§2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 南昌市第二中学 许志斌 动物细胞融合 单克隆抗体 单克隆抗体 单克隆抗体的应用 思考与探究 * 植物体细胞可以杂交，能不能采用类似的方法，让不同种动物的体细胞进行杂交呢？ 1.动物细胞融合：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2.杂种细胞：动物细胞融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 3.融合方法 PEG 灭活和病毒 电激 4.用灭活病毒诱导动物细胞融合过程的示意图 5.细胞融合技术的优点：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 种间 属间 科间 动植物间 难题： ①产量低、纯度差 ②抗体特异性差 ③B淋巴细胞不能无限繁殖 科勒 Georges J.F. K?hler 米尔斯坦 César Milstein 1984年诺贝尔生理学或医学奖 特异性强 灵敏度高 并可能大量制备 1.作为诊断剂 肿瘤 心血管畸形 准确 高效 简易 快速 2.用于治疗疾病和运载药物 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 2.动物细胞培养液是由哪些化学成分组成的？ 糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。 3.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 4.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？ 1978年 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 人—小鼠 1976年 腹水癌细胞—原生质体 人—胡萝卜 1975年 原生质体—血红细胞 酵母菌—鸡 成功年代 细胞来源 生物种类 5.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？ 就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。 6.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 选择性培养基培养；细胞稀释培养法