选育耐受复合抑制剂酿酒酵母提高乙醇产量.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（５）：９７１０５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 选育耐受复合抑制剂酿酒酵母提高乙醇产量 １，２ １ １ １，２ １，２ １，２ 郭雪娇 　查　健 　姚　坤 　王　昕 　李炳志 　元英进 （１天津大学化工学院　天津大学系统生物工程教育部重点实验室　天津　３０００７２） （２天津化学化工协同创新中心合成生物学研究平台　天津　３０００７２） 摘要　能够耐受纤维素预处理中抑制剂的酿酒酵母对高效、经济生产纤维素乙醇至关重要。利 用诱变结合驯化工程选育了一株可耐受复合抑制剂（１．３ｇ／Ｌ糠醛、５．３ｇ／Ｌ乙酸及 １．０ｇ／Ｌ苯酚） 的工业酿酒酵母ＹＹＪ００３。在ｐＨ４．０的含有抑制剂的培养基中，耐受菌株乙醇产率是原始菌株的 ７．８倍，糠醛转化速率提高了５倍。在ｐＨ５．５的复合抑制剂条件下，ＹＹＪ００３发酵时间（１６ｈ）比野 生菌株发酵时间（２２ｈ）缩短６ｈ。在ｐＨ４．０的未脱毒的玉米秸秆水热法预处理水解液中ＹＹＪ００３ 的乙醇产率达到０．５０ｇ／ｇ（乙醇／葡萄糖），乙醇产速达到４．１６ｇ／（Ｌ·ｈ），而对照菌株无乙醇产出。 关键词　抑制剂　酵母　糠醛　乙酸　乙醇　纤维素水解液 中图分类号　Ｑ８１９ 　　近年来生物乙醇作为化石燃料的代替物受到广泛 经济［６，１６１８］。酿酒酵母由于乙醇生产效率高，并对乙醇 关注，普遍认为其在一定程度上可以缓解全球性或区 及一些有毒物质有较高的耐受能力，因此被广泛应用 域性的危机，如过度依赖原油进口、温室气体排放及石 于乙醇生产工业中。利用酵母这些特性更有望选育出 ［１３］ ［１９２１］ 油储量日益枯竭等问题 。与淀粉或甘蔗产乙醇相 耐受多种抑制剂物质的乙醇生产菌株 。 ［４５］ 　　在增强菌体对纤维素水解液中单一抑制剂的耐受 比，纤维素乙醇将是最有潜力、最稳定的液体能源 。 纤维素向乙醇的转化步骤复杂，包括预处理、酶解及微 性及抑制剂作用机制方面已有了较多的研究［２２２４］。然 ［６］ 而相对于单一抑制剂，复合抑制剂不仅仅是累加作用， 生物发酵等 。预处理主要有稀酸法、蒸汽爆破法及 水热法等高温、高压策略，然而这些方法会产生多种抑 协同作用使其更加复杂［２５２６］，其作用机制尚未清晰。 ［７９］ 选育复合抑制剂耐受性菌株更有益于从生物质水解液 制剂等副产品 。预处理过程产生的主要抑制剂分 为三类：呋喃类、弱酸类及酚类。呋喃类包括糠醛和５ 生产乙醇。 羟甲基糠醛（ＨＭＦ）等；弱酸类包括乙酸、甲酸及乙酰丙 　　本研究通过紫外诱变和驯化工程手段筛选到一株 ［１０］ 高耐受性工业酿酒酵母。鉴于抑制剂的复杂性，选择 酸等；酚类包括香草醛、丁香醛、松柏醛等 ，其中低分 ［１１］ 糠醛、乙酸和苯酚三种不同类型抑制剂做为代表形成 子质量的酚类毒性更大 。这些抑制剂对微生物的生 长及乙醇的生产有着严重的抑制作用［１０，１２１３］。 复合抑制剂，其ｐＨ低于４．０或高于５．５。另外，在水热 　　因此，发酵前脱毒或选育高耐受性菌株对乙醇生 法处理所得玉米秸秆水解液中进行了耐受菌株和原始 产至关重要。然而外加脱毒过程，如离子交换或灰碱 菌株的发酵对照研究。 处理过度，既大大地增加了工业投入和成本，也造成了