阿奇霉素和头孢噻肟对肺炎克雷白杆菌联合药敏研究.docVIP

阿奇霉素和头孢噻肟对肺炎克雷白杆菌联合药敏研究 　　摘要　目的：研究阿奇霉素与头孢噻肟对30株临床分离肺炎克雷白杆菌的联合抗菌效应。方法：采用棋盘法设计，微量肉汤稀释法测定。测定不同浓度组合的两种抗菌药物对30株肺炎克雷白杆菌的最低抑菌浓度，计算FIC指数，并观察两药不同加药顺序对效应的影响。结果：阿奇霉素与头孢噻肟联合应用后对肺炎克雷白杆菌的浓度-累积抑菌百分率均比单独应用有较大提高。FIC指数结果表明，阿奇霉素与头孢噻肟联合应用后对肺炎克雷白杆菌20％为协同作用，63％为相加作用，10％为无关作用，7％为拮抗作用。先后联用与同时应用抗菌效应无显著性差异(P＞0.05)。结论：一般情况下，对临床分离肺炎克雷白杆菌，阿奇霉素与头孢噻肟联合应用是合理的。 　　关键词　阿奇霉素　头孢噻肟　肺炎克雷白杆菌　体外联合药敏　棋盘法 　　中图分类号：R969 　　文献标识码：B 　　文章编号：1006―1533(2009)07―0320―03 　　 　　阿奇霉素系新型大环内酯类抗生素，仅对繁殖期的细菌有抑制作用，对静止期的细菌无效。头孢噻肟系第三代注射用头孢菌素，为繁殖期杀菌药。从抗菌作用机理方面来看，通常认为，两者联用，阿奇霉素可拮抗头孢噻肟的抗菌活性。据此，往往不主张两类药联用，然而，近年来国内外许多文献倾向于两类药物的联合应用。为探讨两者联用的合理性，本研究选择临床分离的30株肺炎克雷白杆菌作为革兰阴性杆菌的代表菌之一，通过体外微量棋盘法测定两者联合的相互作用，为临床合理用药提供依据。 　　 　　1　材料 　　 　　本院30株临床分离的肺炎克雷白杆菌。头孢噻肟标准品(每包200 mg，含量为89.3％，批号：130483～200303，设为甲药)，阿奇霉素标准品(每包200 mg，每nag相当于936U，批号：30352～200405，设为乙药)，均由中国药品生物制品检定所提供。Milter Hinton(MH)肉汤培养基(杭州天和微生物试剂有限公司)。比浊仪(Product No.52-1210，法国梅里埃公司)；一次性使用培养板(96孔，系无菌培养板，加盖并用塑料袋包装，孔容量≤0.5 mL，浙江拱车医用塑料厂)；微量取样器(DP29266，DR67172，大龙医疗设备有限公司)。 　　 　　2　方法 　　 　　2.1　抗菌药物储备液配制 　　头孢噻肟以pH6.0，0.1moL/L磷酸盐缓冲液为溶剂，阿奇霉素以乙醇为溶剂，分别以灭菌蒸馏水稀释成最终浓度为1280 mg/L(阿奇霉素为1280 U/mL)的溶液，置-70℃冰箱保存备用。 　　 　　2.2　接种菌液的制备 　　从临床标本(痰液、尿液与宫颈分泌物)中分离出肺炎克雷白杆菌，经VITEK鉴定确认。通过纸片扩散法药敏试验，选出其中30株对两药较敏感的菌株进行实验。 　　在已分纯的待测菌平板上挑取4～5个形态相同菌落接种于3～5 mL的MH肉汤培养基内，于35℃培养4～6h。校正菌液浓度，使其相当于0.5麦氏比浊标准(约含1～2×108cfu/mL)。再用MH肉汤培养基1:200稀释后，即得接种物(菌悬液)。 　　 　　2.3　单药最低抑菌浓度(MIC)测定 　　取药物储备液，以灭菌MH肉汤，按常量对倍稀释法制备接种药液。然后用微量肉汤稀释法精确测定各菌株的单药MIC。 　　 　　2.4　联合药敏试验――微量棋盘稀释法 　　首先按单药MIC确定联合药敏实验药物稀释度。取一次性使用培养板，按法实验。记录单独应用两药的最低抑菌浓度(MIC甲药单用，MIC乙药单用)，并选择最佳组合效应时两药联合时各自的MIC甲药单用和MIC乙药单用；如出现拮抗，则选择最大拮抗作用时两药联合时各自的MIC甲药单用和MIC乙药单用。计算FIC指数(FICI)。FICI=MIC甲药单用/MIC甲药单用+MIC乙药单用/MIC乙药单用。 　　 　　2.5　不同加药顺序联合用药研究 　　以上述操作法进行同时(加药)联用，测定30株肺炎克雷白杆菌的联合药敏。然后选择其中8株细菌(应包括拮抗株等典型菌株)，进行不同加药顺序联用后头孢噻肟与阿奇霉素相互作用研究，分为：1)先甲联用――先加入甲药与菌液，培养2h后再加乙液，继续35℃孵育等；2)先乙联用――先加入乙药与菌液，培养2h后再加甲液，继续35℃孵育等。同样计算FICI，然后与同时联合用药FICI进行比较。 　　 　　2.6　FICI判读 　　协同作用：FICI≤0.5；相加作用：0.5＜FICI≤1.0；无关作用：1＜FICI≤2.0；拮抗作用：FICI＞2。 　　 　　3　结果 　　 　　30株肺炎克雷白杆菌对两药的敏感情况：由甲、乙两药各单药MIC值按文献确定肺炎克雷白杆菌对两药