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丙酮丁醇高产菌株发酵工艺的探讨 　　[摘 要]社会的进步和经济的发展依托能源的消耗，在不可再生的石化能源迅速短缺趋向枯竭的形势下，与汽油产品性质最为接近的生物丁醇成为能源领域的研究热点。丙酮丁醇发酵作为转化生物质为化学品和液体燃料的重要手段为解决能源困境带来发展方向。但传统的丙酮丁醇发酵是利用粮食进行发酵，原料成本较高，为节约原料成本及提高发酵效率，需要进行新型高产菌株及发酵工艺的研究。本文分析丙酮丁醇的性质及发酵原理，寻求合适的发酵菌株及发酵工艺，为丙酮丁醇的高效生产提供基础。 　　[关键词]丙酮丁醇；高产菌株；发酵工艺 　　中图分类号：TQ 223.12+4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）45-0136-01 　　丙酮丁醇是橡胶、油漆、医药、农药、塑料及涂料等轻工业的重要原料和化工溶剂，对现代工业的发展具有重大的促进作用，生物丁醇具有高能量、低挥发性、可混合性及污染少等优点，是燃烧效率很高的燃料，在能源日趋紧张的现代工业中，生物丁醇作为可再生生物性能源具有巨大的发展潜力。丙酮丁醇的生物发酵受发酵工艺的影响较大，需要根据具体的丙酮及丁醇性质采用合适的菌株及发酵工艺进行发酵，确保产品的优质及制备过程高效。 　　一、丙酮丁醇的发展现状 　　1、丙酮丁醇的主要生产方法是发酵法，是丙酮丁醇菌在发酵培养基中有效生长并代谢产生溶剂，发酵液经过精细蒸馏得到相应产品的过程。传统的发酵法以粮食作为发酵培养基原料，随着科技的进步和粮食价格的上涨，传统的发酵法已不再适应现代工业的要求，需要寻求新发酵工艺。 　　2、菌株改良的目标：①菌株能够高效利用农业废弃物或木质纤维素等底物；②提高菌株的溶剂生产能力和目的溶剂的比例；③菌株在固定化细胞发酵及连续发酵过程中表现出较好的生产能力；④菌株充分提高对最终溶剂的耐受性，生产出高浓度的溶剂。 　　二、丙酮丁醇的代谢机理 　　丙酮丁醇的发酵包含产酸期及产溶剂期两部分。产酸阶段，细胞处于指数生产期，产生大量的乙酸、丁酸等有机酸类，并释放二氧化碳及氢气，有机酸的产生引起发酵液的pH值下降。有机酸的释放积累到pH值为4.3时达到一个界定值，此时发酵过程进入产溶剂期，该阶段的细胞生产稳定，有机酸类被还原为丙酮、丁醇、乙醇的溶剂。发酵再继续进行时丙酮丁醇梭菌的活力下降，此时底物的大量消耗，及溶剂累积出现的毒害作用，造成菌体的自溶现象或生成孢子，发酵过程趋于结束。 　　三、丙酮丁醇高产菌株的改良选育 　　1、诱变育种方式 　　在科技的进步和大量的有效实验过程中，诱变育种成为丙酮丁醇发酵育种的选育手段。诱变育种是利用物理化学因素处理微生物细胞，促使其中少数细胞的遗传结构发生相应的变化，引起微生物遗传性状同步变化，利用分离手段从菌种中筛选出少数优良突变株，该类诱变可以充分提高菌种的生产能力，并在发酵过程中改进产品的质量。 　　通过有效实验发现紫外线与亚硝基胍的复合使用对菌株诱变造成突变谱交换，获得正突变的概率高，并且诱变过程中紫外线的作用对DNA分子作用的热点不同，可以弥补单因子修边出现的热点饱和现象，及弥补DNA分子对单因子诱变的不亲和性而产生的无增变效应，使菌株的生产能力充分提高。诱变结束后可以利用BCP平板对高产变异菌株进行有效的筛选，得到的菌株可以更好的在丙酮丁醇发酵过程中发挥发酵作用，为实现最优发酵目标提供保障。 　　2、构建丙酮丁醇梭菌工程菌 　　生物科学的发展促进涉及孢子形成、溶剂耐受性和胁迫抗性等影响溶剂产生的基因研究，众多基因在克隆技术下被克隆并在丙酮丁醇梭菌中高效表达，研究者根据基因敲除方法实现编码乙酸、丁酸支路关键酶的基因或阻遏丙酮、丁醇合成基因的失活，以切断生成乙酸、丁酸的代谢支路或解除对丙酮、丁酸的阻遏，得到符合发酵目的的产品。通过基因工程技术构建基因工程菌，实现了丙酮丁醇合成代谢途径的有效修饰，提高了丁醇及丙酮的产量，为生物发酵法的竞争力增强提供了保障。 　　四、发酵工艺的改进 　　1、选用廉价原料 　　廉价原料的选用可以降低生产的成本，廉价原料多选用纤维素类及剩余农副产品等。玉米芯作为木质纤维原料，具有丰富的纤维素、半纤维素及木质素，因其作为农作物的剩余产品，价格低廉且产量丰富，适宜于进行大范围纤维素的提炼。操作前需要将玉米芯进行木糖提取的处理，将固体残渣进行酸法、碱法或酶解法等预处理，便于纤维霉素的有效分解。 　　丙酮丁醇的发酵过程中分为两个生理阶段，一是菌体生长及产酸阶段的对数生长期，一是有机酸和残糖转化成为溶剂阶段。发酵的过程中，底物过量会抑制梭菌菌株的良好代谢，降低溶剂的有效产出率，因此需要在发酵过程中严格控制发酵液中底物的浓度，辅助抽提技术，对产出的溶剂及时的抽提，保障菌株的稳定发酵。 　　2、同步糖化发酵过程