LC―MSMS测定大鼠血浆中咖啡酸绿原酸及其药代动力学的研究.docVIP

LC―MSMS测定大鼠血浆中咖啡酸绿原酸及其药代动力学的研究 　　[摘要] 该研究建立大鼠血浆中咖啡酸、绿原酸的LC-MS/MS测定方法，并用于大鼠体内的药代动力学研究。6只SD大鼠，单剂量静脉注射（4 mL?kg-1）灯盏细辛注射液，以替硝唑为内标，用LC-MS/MS测定给药后血浆中的药物浓度，并用DAS 1、0软件计算药动学参数。咖啡酸、绿原酸的线性范围分别为2～128 μg?L-1（r = 0、998 1），3～384 μg?L-1（r = 0、998 7）。方法学考察均符合要求。日内、日间变异系数（RSD）均小于10%，精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求。大鼠体中咖啡酸药代动力学参数：t1/2β为（130、91±38、77） min，AUC0-t为（4、89±0、96） mg?min?L-1，CL为（0、12±0、02） L?min-1?kg-1；绿原酸药代动力学参数：t1/2β为（49、38±8、85） min，AUC0-t为（9、54±0、95） mg?min?L-1，CL为（0、09±0、003） L?min-1?kg-1。该研究建立的LC-MS/MS分析方法准确灵敏，适于咖啡酸、绿原酸的药代动力学研究。 　　[关键词] 灯盏细辛注射液；绿原酸；咖啡酸；大鼠；药代动力学；LC-MS/MS 　　[稿件编号] 2013-03-13 　　[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项（2012Z002）；江苏省中医药领军人才项目（LJ200906）；江苏高校优势学科建设工程项目（2010） 　　[通信作者] *居文政，Tel：（02560310，E-mail：wzhju333@163、com 灯盏细辛注射液为灯盏细辛的干燥全草经提取制成的中药注射液，收载于2010年版《中国药典》一部[1]，具有活血化瘀，通络止痛的功效，是目前临床上使用较为广泛的治疗心脑血管疾病的传统中药之一。以往研究表明灯盏细辛的有效成分主要为黄酮类成分――灯盏乙素。通过深入研究，发现酚酸类成分也具有扩张血管和抑制血栓形成的药理活性[2]。中药酚酸类成分包括咖啡酸、绿原酸等，因其显著的抗炎、抗氧化、抗凝血等多种生物活性而被国内外广泛研究[3-5]。 　　在灯盏细辛注射液中，已证实黄酮类与酚酸类协同发挥药效作用[6-7]，而灯盏乙素在体内代谢过程已有较多文献报道[8-10]，对酚酸类成分的体内代谢过程研究却比较少。因此深入研究酚酸类成分对明确灯盏细辛注射液的药动药效至关重要。本文旨在建立高效、灵敏的LC-MS/MS用于测定大鼠尾静脉注射灯盏细辛注射液后绿原酸和咖啡酸的血药浓度，并用于灯盏细辛注射液在大鼠体内的药代动力学研究。 　　1 材料 　　1、1 试药 灯盏细辛注射液（云南生物谷灯盏花药业有限公司，批规格10 mL/支）；对照品咖啡酸（批号110885-200102）、绿原酸（批号110753-200413）和替硝唑（批号100336-200402）均购于中国食品药品检定研究院。水为超纯水，甲酸、甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 　　1、2 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪；API 4000 LC-MS/MS三重四级杆质谱仪，配有电喷雾化离子源（ESI），色谱工作站：Analyst 1、4、2；AE240电子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）；MICRO-17R冷冻离心机（美国Thermo公司）；WH-2微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）；Drict-Q5超纯水机（法国Millipore公司）。 　　1、3 动物 SD大鼠，雌雄各半，6只，体重250～270 g，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK（浙）2008-0033。 　　2 方法 　　2、1 色谱及质谱检测条件 Agilent ZOBAX SB C18色谱柱（4、6 mm×150 mm， 5 μm）；流动相为甲醇-2 mmol?L-1醋酸铵水溶液（60∶40）；流速为500 μL?min-1；柱温30 ℃。离子源ESI；离子化模式负离子；定量模式为多反应检测模式（MRM）；离子源电压4 000 V；离子源温度400 ℃；绿原酸的DP，EP，CE，CXP-56 ，-11，-30，-4 V；咖啡酸的DP，EP，CE及CXP分别为-50，-10，-25，-5 V；替硝唑的DP，EP，CE，CXP分别为-25，-10，-15，-8 V；检测对象绿原酸m/z 353、1/191、0；咖啡酸m/z 178、9/134、9；替硝唑m/z 246、0/125、8。 　　2、2 对照品溶液的配制 精密称取适量绿原酸对照品，用甲醇配制成3、84 mg?L-1的储备液；精密吸取适量，