乙肝后肝癌发生过程中生长抑素受体演变及相关因素的研究.docVIP

乙肝后肝癌发生过程中生长抑素受体演变及相关因素的研究 　　摘要：目的 希望通过研究能够找到更好的治疗方案，遏制乙肝病毒的感染，进而提高患者的生活质量，增加患者的寿命。方法 利用免疫组化法和放射免疫法来分别检测身体中的SSTR1-5蛋白表达以及SST含量，之后再利用统计学的方法来进行处理。结果 研究的40例肝癌的患者的类型都是中-低分化，而且在癌旁组织中每个患者都有不一样的非典型增生的现象出现。结论 通过研究发现，肝癌前之所以会产生病变主要是因为肝细胞出现了不典型增生的现象，而且不典型增生的现象主要出现在癌旁组织中，对患者影响非常大。 　　关键词：乙肝；肝癌；生长抑素受体演变；相关因素；研究 　　原发性肝细胞癌，英文缩写为HCC，这种病症在我国肿瘤患者中比较普遍，而且发病率近些年来越来越高，早已引起了医学界的重视。在我国原发性肝细胞癌患者中将近九成是由于乙肝病毒引起的，再加之原发性肝细胞癌预防处理相对来说比较差，因此研究更好的治疗方法无论是对患者本身，还是对医学研究意义都十分重大。在乙肝后肝癌发生时，其生长抑素受体会发生演变，接下来，笔者就这种演变及其相关因素进行有效的研究。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 根据研究目的选择出5名自愿参与研究的人员，其肝组织经过检查并没有任何病变；之后又选择出14例患者，其肝组织有些许病变，属于慢性肝炎；然后再选择出40例患者，其肝组织病变相对严重，属于肝硬化，这40例患者中有4例属于良性肝病，已经做完手术；最后在选择80例患者，其肝病变主要属于肝癌癌旁组织以及肝癌组织，这些患者的年龄范围阔度比较大，21～79岁。这些患者都是来自于一个医生，这样便于研究，因为医生比较清楚每位患者的情况。 　　1.2主要试剂 主要试剂有以下几种：①RNA样品储存液以及提取试剂；②特异性引物；③试剂盒，要准备很多种类的试剂盒，每一种类的试剂盒的作用不同，因此在研究时，要做好标签，以免发生事故，其中最主要的试剂盒有生长抑素放免试剂盒以及浓缩型DAB试剂盒。 　　上述选择的试剂一定要确保质量，无污染，要出自正规的企业，在试剂进入实验之前，就要做好全面的检测，确保不出现任何的意外情况，否则不仅影响研究结果，还会造成严重的后果。 　　1.3方法 　　1.3.1逆转录一聚合酶链反应检测SSTR1-5亚型mRNA的表达取手术切除的新鲜标本组织存储于RNA储存液中，-20℃冻存备用。按试剂盒说明步骤，用TRIZOLReagent提取总RNA。2%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。将提取的RNA溶于0.1%DEPC去离子水中，核酸蛋白定量仪（BloRADsmartSPec丁M3000）检测RNA纯度及定量，OD值）1.8的标本进行实验。 　　1.3.2免疫组化法检测SSTR1-5蛋白表达取手术切除的新鲜标本组织，以10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，连续切片备用。组织切片经常规脱蜡水化后；高压锅中抗原修复3min；按内源性生物素阻断试剂盒说明操作阻断内源性生物素；3%水：阻断内源性过氧化氢酶15min；非免疫源性血清封闭I0min；加一抗工作液（SSTR1-5浓度均为1：300） 孵育4℃过夜；生物素化二抗37℃孵育15min；过氧化氢酶标记的亲和素孵育5min；现配DAB试剂，显影5～10min，棕褐色染色为阳性，镜下观察终止反应；苏木精染色smin，盐酸一酒精分化5s，碳酸铿反蓝lmin；常规脱水透明，中性树胶封片；01五厂队USBX41仪器照相。 　　实验以手术切除的人小肠组织为阳性对照，以PBS替代一抗为空白对照。阳性表达强度以阳性染色光密度值（IOD值）表示，在400倍放大条件下，每张切片随机取5个视野计数阳性细胞，Image-ProPlus4.5软件定量测定阳性染色IOD值，取均值为该标本的IOD值；每高倍镜（400×）视野5个阳性细胞判断为阴性。 　　1.3.3放射免疫法（Radioimmunoassa乳班A）检测SST含量：取新鲜组织标本-80℃冻存备用；取组织块，称重200mg，加2ml生理盐水100℃煮沸3min，加入0.1N盐酸0.5ml，剪碎后，超声匀浆器匀浆；4℃孵育1～2h，加0.1N NaoH0.5ml中和；4℃低温离心3000rpm×30min，取上清液；考马斯亮蓝法测定蛋白浓度，蛋白液-20℃冻存待检。放射免疫分析检测按SST放免试剂盒操作说明进行。放免检测分析仪自动绘制标准曲线并计算和打印检测结果。 　　2 结果 　　2.1从研究中能够得出肝组织病理，40例肝癌患者中干细胞都或多或少的存在着非典型性增生的现象，选择的五种标本中，其肝癌组织特征各有不同，其中主要表现在PCR体系以及PT反应体系中。 　　2.2在五种肝组织标本中都可以检测出SSTR1-5mRN