鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞的蛋白质组学研究-急诊医学专业论文.docxVIP

- - PAGE 10 - 鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞的蛋白质组学研究 中 文 摘 要 目的: 通过分离并鉴定鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞的差异表达蛋白质，以 发现可能在鲍曼不动杆菌脓毒症中起关键作用的蛋白和可用于早期诊断的鲍曼不 动杆菌脓毒症标志物。 方法：将 24 只成年雄性 Wistar 大鼠分为正常对照组、鲍曼不动杆菌脓毒症 6 小时 组和鲍曼不动杆菌脓毒症 12 小时组，正常对照组腹腔注射生理盐水，鲍曼不动杆 菌脓毒症组腹腔注射鲍曼不动杆菌（ATCC19606），并于 6 小时和 12 小时后取外 周血分离中性粒细胞，提取中性粒细胞的总蛋白后利用双向凝胶电泳分离蛋白并 进行银染，使用 ImageMaster 软件进行分析比较，选取在鲍曼不动杆菌脓毒症中明 显差异表达的蛋白点行质谱分析，并选取蛋白加以免疫印迹验证。 结果： 1. 获得了分辨率和重复性均很好的双向凝胶电泳蛋白图谱，每组胶的蛋白表达点 为 2900 个左右，平均匹配率分别为 95%、90%、91%。 2. 对筛选出的在鲍曼不动杆菌脓毒症中明显差异表达的 50 个蛋白点，共有 41 个 蛋白点被成功鉴定，分别属于抗氧化蛋白、信号传导蛋白、细胞骨架及调控蛋白、 能量代谢蛋白和蛋白酶类蛋白，其中在鲍曼不动杆菌脓毒症中高表达的 24 个，低 表达的 17 个。 3. 在 41 个蛋白中选取蛋白进行免疫印迹验证，验证结果基本与双向凝胶电泳及 质谱鉴定结果一致。 结论： 1. 鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞总蛋白和正常大鼠中性粒细胞总蛋白相 比差异显著，且脓毒症 6 小时组和 12 小时组的部分蛋白也有显著差异。 2. 本实验成功鉴定出 41 个差异点，分别属于抗氧化蛋白、信号传导蛋白、细胞 骨架及调控蛋白、能量代谢蛋白和蛋白酶类蛋白，这些蛋白的改变和鲍曼不动杆 菌脓毒症时中性粒细胞的过度活化或抑制密切相关。 3. 差异蛋白中的抗氧化蛋白和信号传导蛋白可能在鲍曼不动杆菌脓毒症中起关 键作用并且可能为早期诊断和治疗鲍曼不动杆菌脓毒症提供新的理论依据。 关键词：鲍曼不动杆菌；脓毒症；大鼠；中性粒细胞；蛋白质组学 Proteomic analysis of neutrophils of rats with Acinetobacter baumannii sepsis Abstract Objective：To detect potential proteins which may play a key role in pathogenesis and early diagnosis for Acinetobacter baumannii sepsis, we compared the protein profile of neutrophils of na?ve rats with that of rats infected with Acinetobacter baumannii. Methods：24 adult male Wistar rats were divided into normal control group, Acinetobacter baumannii sepsis in 6hour group and Acinetobacter baumannii sepsis in 12hours group, normal control group by intraperitoneal injection of saline, Acinetobacter baumannii sepsis group by intraperitoneal injection Acinetobacter baumannii ( ATCC19606), and Separation of neutrophils from peripheral blood after 6 hours and 12 hours, extraction of neutrophil total protein , using two-dimensional gel electrophoresis separation of proteins and silver staining, using ImageMaster software for analysis and comparison, some of the proteins were isolated and verified by line mass spectrometry analysis and Western blot. Results： Two-dimensional gel electrophoresis prot