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图们江下游湿地土壤微生物特征的研究 　　摘要：选取了图们江下游典型沼泽、河流与湖泊湿地，以优势植被群落下土壤为研究对象，采用磷脂脂肪酸法测定了土壤微生物群落结构。结果表明：湖泊湿地中3种植被群落下土壤革兰氏阳性菌、细菌、真菌、放线菌含量差异显著，沼泽湿地与河流湿地中土壤真菌和放线菌含量无显著差异，其他微生物类群则表现出不同的变化特征。研究区湿地土壤细菌占总PLFA含量的90%以上，而放线菌占2%～4%，真菌占1%～7%。通过对9种植被群落下土壤微生物群落进行聚类分析，距离5～10与10～15时，分别将种植被群落下土壤微生物分为4组与6组，表明同种类型湿地下的微生物群落也会出现较大差异。 　　关键词：湿地；植被；土壤微生物；湿地类型 　　中图分类号：S153.6 　　文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2016）16-0169-02 　　1 引言 　　植物与土壤微生物作用是陆地生态系统中的重要组成部分，它们之间的相互作用是生态系统地上、地下结合的重要纽带[1]，所以湿地植被与土壤微生物的研究也越来越受国内外学者的重视。目前，湿地土壤微生物的研究主要集中在湿地植被与土壤微生物关系[2]、植被入侵与湿地土壤微生物的关系[3]、恢复湿地过程中湿地植被与土壤微生物特征[4]、湿地植被演替过程中湿地土壤微生物 [5]等方面的研究，但是探究湿地类型与植被群落对湿地土壤微生物作用的相关研究很少。湿地类型是不同水文地貌条件综合作用形成的，水文地貌特征差异导致湿地不同的发育特征，所以不同类型湿地环境也决定着其相应的微生物群落。近些年来，由于人口增长及农业化的发展，湿地面临着严重威胁，湿地生态系统功能退化已经成为了世界范围的问题，微生物在维持湿地土壤功能方面起重要作用，所以加强湿地微生物研究，对湿地生态系统功能维持具有重要作用。研究以图们江下游湿地土壤微生物为研究对象，探讨湿地类型、植被群落与土壤微生物群落结构之间关系，为该湿地土壤微生物的深入研究提供一定研究基础。 　　2 材料与方法 　　2.1 研究区 　　研究区位于吉林省东南部，是中国、朝鲜、俄罗斯靠近日本海的三国交界地带，行政区上，图们江下游是珲春市的范围，地理坐标为东经129°52′00″～131°18′30″、北纬42°25′20″～43°30′18″。该地区气候属于近海中温带海洋性季风气候区，由于靠近日本海，受海洋性气候的影响，与同纬度地区相比，冬暖夏凉，降水量较多，年平均降水量618.1 mm，年平均气温5.6 ℃。图们江下游湿地发达，类型多样，分布着河流型、沼泽型、湖泊型及人工湿地，具有较高的生产力和丰富的生物多样性[6]。 　　2.2 样品采集 　　该研究野外调查于2014年8月，选择该地区典型的沼泽、湖泊和河流型湿地。为了探究植被群落与湿地土壤微生物关系，以单一优势湿地植被群落下的土壤微生物为研究对象，根据湿地类型植被群落分布特点，每种类型湿地中选取3种优势植被群落，每种群落范围应大于2m×10m，并对采样环境进行记录。沼泽湿地中水文过程影响均质，选取了长芒稗（Echinochloa caudata）、小叶章（Calamagrostis angustifolia）与灰脉苔草（Carex appendiculata）。湖泊湿地受季节性水文过程影响严重，沿水文梯度依次选取了长芒稗（Echinochloa caudata）、芦苇（Phragmites australis）与小叶章（Calamagrostis angustifolia）群落。河流湿地中水文过程影响均质，选取了菰（Zizania latigolia）、灰脉苔草（Carex appendiculata）与大穗苔草（Carex rhynchophysa）。 　　土壤样本采集：在每种植被带中随机选择3处1 m×1 m样方（间隔控制2～3 m），并用土钻在每个样方随机采集5钻0～10 cm土层的土壤。除去土壤样品中的残根，将3处的土壤混合均匀，过2 mm筛，放入冰盒，带回实验室放入-80 ℃冰箱保存，用于土壤微生物群落测定。 　　2.3 土壤PLFA测定 　　土壤微生物群落测定采用磷脂脂肪酸的方法[7，8]。提取步骤为：①称取4 g冻干土，分别加入8 mL氯仿，16 mL甲醇，6.4 mL柠檬酸缓冲液，避光震荡2.5 h，在25 ℃，4000 r/min离心10 min，转移上清液，再向土壤中加入相同体积的氯仿、甲醇和柠檬酸缓冲液，震荡1h，离心，合并2次上清液，氮气吹干。②采用5 mL（至少分5次）甲醇转移提取物，并过硅胶柱，洗脱液依次8 mL氯仿，16 mL丙酮，8 mL甲醇。③收集甲醇相，吹干，用1 mL甲醇，甲苯（1∶1），1 mL 0.2M KOH甲醇溶液混匀后，2 mL去离子水