哈巴河县野生杨树菇菌种分离及培养基筛选的研究.docVIP

哈巴河县野生杨树菇菌种分离及培养基筛选的研究 　　摘要 采用对比法，对哈巴河县野生杨树菇不同液体培养基进行筛选。结果表明，在温度25 ℃、湿度80%的条件下，市售PDA和MYPA培养基适宜野生杨树菇菌种分离和菌丝扩大繁殖。该结果可为今后栽培生产杨树菇提供技术指导。 　　关键词 野生杨树菇；菌种分离；培养基筛选；新疆哈巴河 　　中图分类号 S646 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）01-0057-02 　　杨树菇（pleurotus ostreatus），因自然发生在哈巴河县杨树树干或伐桩上而得名。野生杨树菇富含氨基酸和维生素，菇体肥厚，香气浓郁，脆嫩爽滑，味道鲜美。杨树菇子实体大型，菌盖扁半球形或呈扇形，直径4～20 cm，初期浅黑色，后期逐渐变淡，成熟时呈浅灰色或白色；菌盖表面平滑，菌肉白色，肥厚；菌柄短，长2～8 cm，基部有绒毛，侧生或偏生，内实，基部相连，菌盖重叠[1]。杨树菇既是新一代高档的珍稀食用菌，也是一种极具开发价值的药用菌[2]。本文进行3种培养基筛选试验，找出适合野生杨树菇的最佳培养基。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 供试仪器设备。纯水及超纯水系统（HY-CJ-1A）、手提式压力蒸汽灭菌锅（YXQ-280SD）、生化培养箱（SPX-250）、生物安全柜（BSC-1360ⅡA2）、温度湿度计、电子天平、培养皿。 　　1.1.2 供试试剂。马铃薯葡萄糖琼脂（不含抗生素）、蛋白胨、麦芽浸膏、琼脂粉和酵母膏，由北京奥博星生物技术有限公司生产。供试菌株采自哈巴河县。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 培养基配方与制作。①PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）[3]：将200 g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1 000 mL水，煮沸20～30 min至马铃薯酥而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，再补水至1 000 mL，加入琼脂20 g溶化，再加入葡萄糖20 g搅拌均匀，趁热分装于试管中，用棉花塞塞好，每个试管10 mL。②市售PDA（北京奥博星生物技术有限公司）：取试剂38 g，加水1 000 mL水煮沸，搅拌均匀，趁热分装于试管，用棉花塞塞好，每个试管10 mL。③MYPA（麦芽酵母膏蛋白胨琼脂培养基）[4]。先在铝锅中加入1 000 mL水加热，再取麦芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、琼脂20 g，放入锅中搅拌均匀后煮沸，趁热分装于试管，用棉花塞塞好，每个试管10 mL。 　　1.2.2 母种培养。将分装好的不同的试管培养基放入灭菌器内，当锅内压力达到0.15 MPa（锅内温度127 ℃）时保持30 min，灭菌结束后待锅内压力自然降至0时才可打开锅盖[5]。待培养基灭菌完成后，取出倾斜放置在生物安全柜中冷却。在灭菌的同时，将采集好的菌株先后用纯水、超纯水、75%酒精清洗干净放置在生物安全柜中。 　　接种前开启紫外灯30 min，关闭紫外灯后，开启无菌循环系统，先用75%酒精棉球擦手，点燃酒精灯，将小刀和铁丝在火焰上方消毒，用小刀将菌株沿菌盖至菌柄中间纵向切开，在菌柄和菌盖交界处，用小刀切出一小块菇体，每块0.8 cm左右，厚度0.2 cm，然后用铁丝挑起菇体放入培养基斜面中心处[6]，每接种1次都要对小刀、铁丝在酒精灯上消毒。接种完成后放在25 ℃左右的培养箱内暗光培养，每天通风换气，控制空气相对湿度80%左右，观察记录菌丝生长情况，待生长最快的菌丝接近培养基另一端时，进行菌种复壮培养[7]。 　　1.2.3 母种扩繁。根据菌丝的生长情况，选择菌丝长势很好且无杂菌的培养基中进行扩繁。接种前开启紫外灯30 min，手、台面、接种工具、母种管用酒精棉球擦拭消毒，点燃酒精灯，火焰上方灼??接种药勺后冷却，凡是伸进试管的杆部均过火灭菌。将原始母种和空自斜面培养基同时握在左手，右手拔掉棉塞，用手将试管口在火焰上方不断搅动，先用药勺弃去原始母种前端1 cm处，然后快速移取0.5 cm2大小的菌种接入试管斜面培养基中央。抽出药勺，再将试管口在火焰上方搅动，在火焰旁塞上棉塞，另一只手换接种管，重复上述操作，接种完毕后贴上标签。接种后，放在培养室内避光培养，培养初期每天都要仔细观察，对污染的试管及时挑除，以免菌丝将污染处盖住，难以挑出，造成损失。 　　1.2.4 菌丝生长量测定。先将配制好的不同的培养基200 mL分装于250 mL的锥形瓶内，用棉塞塞好，然后将平面培养皿与锥形瓶放入高压灭菌锅内灭菌0.15 MPa时保持30 min，灭菌完成后在超净工作台内趁热将不同的培养基倒入平面培养皿上，平面培养皿的厚度为2 mm。冷却后，通过从已培养好的杨树菇母种试管中，用环状接种针在火焰旁取大小相等的菌块，放入平面培养皿的中央