姬松茸粗多糖抗氧化的作用.docVIP

姬松茸粗多糖抗氧化的作用 　　为研究姬松茸(Agaricus blazei)粗多糖的抗氧化作用,对姬松茸粗多糖的还原能力、螯合金属离子能力,清除DPPH#8226;和O??2-#8226;的能力及体外抗脂质过氧化能力进行测定。结果表明,姬松茸粗多糖具有一定的抗氧化能力,且随其浓度的增加而增强。当浓度为2 mg/mL时,还原力测试混合液的吸光值为0.293,对金属螯合率、DPPH#8226;和O??2-#8226;的清除率以及体外脂质过氧化抑制率分别为40.1%、88.8%、71.2%和84.5%。 　　姬松茸; 粗多糖; 还原力; 金属螯合率; 自由基清除率; 脂质过氧化 　　 　　姬松茸(Agaricus blazei Murill)又名小松菇、柏式蘑菇、巴西蘑菇,隶属担子菌纲(Basidiomycetes)伞菌目(Agaricales),除含有丰富营养成分外,还含有对人体有保健作用的功能成分,尤其是多糖类,具有提高人体免疫力、抑制肿瘤、降血糖、降血脂、抗炎、抗动脉硬化等多种生理功能[1]。据文献报道,植物多糖对物理的、化学的及生物来源的多种活性氧(ROS)具有良好的清除作用,能抑制紫外照射所导致的脂质过氧化和体外H??2O??2诱导的红细胞溶血[2~6],增加超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH??2Px)活性等[7]。本试验从姬松茸粗多糖的还原能力、螯合金属离子能力,清除DPPH#8226;和O??2-#8226;的能力及体外脂质抗氧化能力等方面,来探讨姬松茸多糖的体外抗氧化作用,寻求其作为功能性抗氧化剂的可能,从而为姬松茸的综合开发应用提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1材料 　　姬松茸(A. blazei)子实体由山西农业大学食用菌中心提供。 　　1.2主要试剂 　　2,2 二苯基 1 苦基肼基游离自由基(2,2 Diphenyl 1 picrylhydrazyl radical,DPPH#8226;)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、3 (2 吡啶基) 5,6 双(4 苯磺酸) 1,2,4 三嗪(Ferrozine)由Sigma公司提供,其他试剂均为国产分析纯。 　　1.3粗多糖的制备 　　姬松茸子实体干燥粉碎后过80目筛,粉末按料液比1/10加乙醚,封口,用磁力搅拌器搅拌20 min,8层纱布过滤,重复处理3次,得脱脂姬松茸粉。然后脱脂姬松茸粉加水(料水比1/10),沸水浴5 h,冷却至室温后,用8层纱布过滤,重复提取1次,合并两次提取液,加入等体积无水乙醇,混匀,静置24 h,42 000 g离心5 min,弃上清液,加入约5倍体积丙酮洗涤沉淀,重复数次,直至丙酮溶液无色。用蒸馏水溶解沉淀,加入到DEAE 纤维素柱(北京恒业中远化工有限公司提供)中,用蒸馏水洗脱,冷冻干燥(物料温度:-40 ℃,冷井温度:-40 ℃,加热板温度:60 ℃,真空度:20 Pa),得纯化粗多糖。加入蒸馏水得2 000 SymbolmA@ g/mL初始溶液,然后再依次稀释得浓度为1 000、500、250、125和62.5 SymbolmA@ g/mL的粗多糖溶液。 　　1.4抗氧化试验 　　1.4.1还原能力的测定 　　参考OYAIZU的方法[8]加以改进,不同浓度样品各取0.5 mL,分别加入1.25 mL PBS(pH 6.6,0.2 mol/L)和1.25 mL 1% K??3Fe(CN)??6,50 ℃反应20 min,然后再分别加入1.25 mL TCA(10%,w/v),42 000 g离心10 min,取上清液2.5 mL,与0.25 mL新配的FeCl??3 (0.1%,w/v)混合摇匀后,在700 nm处检测混合溶液的吸光值。 　　1.4.2螯合金属离子能力的测定 　　参考DECKER的方法[9]加以改进,将600 μL待测液与40 μL 2 mmol/L FeCl??2混合后加入80 μL 5 mmol/L Ferrozine试剂,充分混合后,室温下反应10 min后,在562 nm处测吸光值。计算各待测样品螯合金属离子的能力。 　　螯合率(%)=(1-Ai-AjAc)×100 　　(Ai:添加样液和Ferrozine试剂的混合液吸光值;Ac:未添加样品的混合液吸光值;Aj:未添加Ferrozine试剂的混合液吸光值) 　　1.4.3清除DPPH#8226;能力测定 　　清除DPPH#8226;能力测定参照文献[10]进行。 　　清除率(%)=A??0-(A-A??b)A??0×100 　　(A??0:无水甲醇吸光值;A:样液添加DPPH#8226;及无水甲醇的吸光值;A??b:样液添加无水甲醇而未添加DPPH#8226;的吸光值) 　　1.4.