快原子轰击离子化质谱的研究酚类化合物抗氧化的作用.docVIP

快原子轰击离子化质谱的研究酚类化合物抗氧化的作用 　　摘 要 为了建立简便、快速筛选高效、低毒的新型抗氧化药物的方法，本研究采用快原子轰击离子化质谱（FAB-MS）对酚类化合物抗氧化作用强弱进行了研究。考察了基质、轰击时间和样本浓度对FAB-MS 谱中分子离子（M+?）相对强度的影响，研究了黄酮类化合物在FAB-MS谱中的I（M+?）/I（【M+H】+）比值与其抗氧化活性的相关性。对12种酚类化合物的抗氧化活性进行了预测与评价，并与硫代巴比妥酸法（TBA）检测的脂质过氧化抑制率进行比较，验证FAB-MS方法的可靠性。结果表明，由FAB-MS获得的I（M+?）/I（【M+H】+）比值能较好地反映酚类化合物抗氧化作用的强弱，可以作为抗氧化剂的体外筛选或预测方法，有助于加速新型抗氧化药物的发现。 　　关键词 抗氧化活性； 快原子轰击离子化质谱； 酚类化合物； 黄酮类化合物 　　1 引 言 　　氧自由基与心脑血管、肿瘤及老年性疾病的发生具有密切关系【1～4】，抗氧化药物在临床、保健、食品等领域被广泛应用，寻找高效、低毒的抗氧化剂备受重视。目前，检测或评价化合物抗氧化活性的常用方法有电子自旋共振法【5～7】、电化学方法【8】、色谱法 【9，10】和液相色谱质谱联用法（LC-MS）【11，12】等。这些检测方法的共同点是样品处理时间长、检测及其数据处理繁琐，包括羟自由基（?OH）的产生体系以及化合物捕捉?OH的反应，对大量样品的快速检测具有一定的局限性。因此，建立一种简便、快速检测化合物抗氧化作用强弱的新型分析方法，对加快抗氧化药物的筛选及研发具有重要意义。 　　快原子轰击离子化质谱（FAB-MS）方法是一种成熟的质谱技术。大多数化合物的FAB-MS谱中主要产生【M+H】+离子，也有一些化合物产生比较强的分子离子M+?。本实验室前期探索了FAB-MS谱中M+?的相对强度与化合物抗氧化作用强弱的相关性【13】，在此基础上，本实验系统考察了实验条件对M+?相对强度的影响，建立了筛选或预测酚类化合物抗氧化作用强弱的简便、灵敏、快速的FAB-MS检测方法，并且与常用药理活性筛选方法进行对比分析，验证了该方法的可靠性。由于FAB-MS方法具有样品量少、无需复杂样品处理、检测时间短等特点（可直接将样品溶液与基质混合后涂于靶上测定），因此本方法的建立将有助于加快抗氧化药物的研发。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　AutoSpec Ultima-Tof串联质谱仪 （英国Micromass公司）； FAB源，Cs+离子枪，加速电压8000 V，分辨率调节为1000。 　　甲醇（分析纯，北京化工厂）； FAB-MS谱测定使用的基质：甘油 （G，分析纯， 北京化工厂）； 间硝基苄醇 （m-NBA，色谱纯，美国Sigma-Aldrich公司）； 硫代甘油 （TG）、二硫代苏糖醇/硫代甘油（DTT/TG 12）和1，2二巯基甘油 （BAL）均为色谱纯（日本Tokyo Kasei Kogyo公司）。 　　黄酮类化合物、酚类化合物以及木脂素类化合物（中国药品生物制品检定所）。黄酮类化合物的结构式见表1。 　　2.2 I（M+?）/I（【M+H】+） 比值的计算 　　I（M+?）/I（【M+H】+）值表示M+?与【M+H】+离子的相对强度比值，扣除M+?峰13C同位素对【M+H】+峰的贡献后，获得二者的相对峰强度比值。 　　基质为间硝基苄醇（m-NBA），样品用甲醇溶解。I（M+?）/I（【M+H】+）值均采用10～20次扫描时间的平均结果。采用硫代巴比妥酸法（TBA）检测化合物对脂质过氧化（LPO）的抑制率（IR）。 　　IR=（1-AS/A0） 　　3 结果与讨论 　　3.1 基质对I（M+?）/I（【M+H】+）值的影响 　　选择合适的基质进行FAB-MS谱测定是关键环节。本研究选择5种酚类和黄酮类化合物，系统考察了基质对其I（M+?）/I（【M+H】+）值的影响。由表2可见，对于同一化合物，使用不同基质得到的I（M+?）/I（【M+H】+）值不同， m-NBA最有利于M+?离子的形成。由表3可见，不同化合物使用相同基质得到的 I（M+?）/I（【M+H】+）值大小顺序保持不变。因此，该值大小虽然与基质种类有关，但主要决定于化合物自身生成M+?和【M+H】+离子的竞争能力；同时说明采用相同基质比较不同化合物的I（M+?）/I（【M+H】+）值具有可行性。 　　3.2 轰击时间对I（M+?）/I（【M+H】+）值的影响 　　通常，FAB条件下的离子化过程在空间上可分为凝聚相区、界面区、气密层区和高真空区4个区域。M+?离子和【M+H】+离子都要通过气密层区进入高真空区，进而被检测分析。因此，气密层的稳定性对于M+