水稻组织石蜡切片-Bio-protocol.PDF

/e1010140 DOI:10.21769/BioProtoc.1010140 水稻组织石蜡切片 Paraffin Embedding Rice Tissues and Sectioning 程珂，都浩，欧阳亦聃* 作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：diana1983941@ 引用格式：程珂，都浩，欧阳亦聃. (2018). 水稻组织石蜡切片. Bio-101 e1010140. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010140. How to cite: Cheng, K., Du, H. and Ouyang, Y. D. (2018). Paraffin embedding rice tissues and sectioning. Bio- 101 e1010140. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010140. (in Chinese) 实验原理：用石蜡包埋组织块制作的显微切片。经取材、固定、洗涤和脱水、透明、 浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。在显微镜下可 清晰观察细胞组织的形态结构。 实验目的：石蜡切片是研究细胞生物学的基础技术，不仅是研究组织细胞形态的重要手 段，更是RNA 原位杂交、TUNEL 法检测细胞凋亡、免疫组织化学等分子细胞生物学的 基本步骤。 关键词：固定，包埋，组织切片 材料与试剂 1. 载玻片及盖玻片 2. 甲醛 (国药试剂) 3. 冰乙酸 (国药试剂) 4. 二甲苯 (国药试剂) 5. 无水乙醇 (国药试剂) 6. 固体石蜡 7. 番红 8. 固绿 9. 甲苯胺蓝 10. 加拿大树胶 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010140 DOI:10.21769/BioProtoc.1010140 11. 50% FAA 固定液 (见溶液配方) 12. 70% FAA 固定液 (见溶液配方) 13. 0.5% 甲苯胺蓝溶液 (见溶液配方) 14. 1%番红 (见溶液配方) 15. 1%固绿 (见溶液配方) 仪器设备 1. 切片机及刀片 2. 粘片台 3. 恒温箱 实验步骤 1. 取材与固定：将所需材料尽量剪小，加入预冷的FAA 固定液中，固定液体积应不少 于材料体积的10 倍。固定液放冰上，抽真空15 min，缓慢放气，再重复两次，直 到材料沉底。 注：抽真空时要避免固定液沸腾，以免破坏细胞结构。因为抽真空时会导致固定液 大量挥发，成分改变，抽完真空要将固定液倒出，换新鲜的固定液，固定过夜。 2. FAA 固定液固定样品1-2 天，可直接用于下面的操作，如需较长时间保存，应移至 70%酒精中可保存数月。 3. 脱水：将样品移至做石蜡切片的小瓶中，进行脱水步骤前，首先要用相应浓度的乙 醇溶液洗去固定液中的甲醛、乙酸。如用50% FAA 固定的，要先用50% 乙醇替换 固定液，一般换三次，每次30 min；如果是用70% FAA 固定，先用70%乙醇洗 掉固定液，换三次，每次30 min。然后梯度乙醇脱水： 乙醇溶液 时长 70%乙醇 至少1 h，可过夜,亦可长期保存 85% 乙醇 1 h 95%乙醇（含伊红或曙红） 1-2 h 注：此处伊红或曙红目的是组织着色，方便包埋及修蜡块。 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2 /e1010140 DOI:10.21769/BioProtoc.1010140 4. 继续脱水和透明（可以用二甲苯或氯仿），二甲苯透明： 溶液