多年生簇毛麦着丝粒重复序列的分离与鉴定-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 摘 要 摘 要 簇毛麦属 Dasypyrum (也称 Haynaldia)是小麦的重要近缘属之一，它包括 2 个 物种，即分布于地中海和西南亚的二倍体簇毛麦（D. villosum，基因组为 VV）和 分布于北非的四倍体多年生簇毛麦（D. breviaristatum， 基因组为 VbVbVbVb）。簇 毛麦属物种具有多种优良性状是栽培小麦所需要的，如具有抗白粉病、抗秆锈和 叶锈病、抗全蚀病、耐寒耐旱和蛋白质含量高等，可以作为小麦抗病、高产、优 质育种的重要遗传资源。 通过 PCR 扩增，我们从多年生簇毛麦中分离得到两个片段大小分别为 920bp 和 1003bp 的重复序列，分别命名为 pDvC1 和 pDvC2。通过 BLAST 序列比对发 现，pDvC1 和 pDvC2 与 Ty3-gypsy 型反转录转座子的外壳蛋白编码基因序列有高 度的同源性。以 pDvC1 和 pDvC2 序列做为探针，我们利用荧光原位杂交分析了 它们在小麦族多种物种的染色体中的分布情况。原位杂交结果显示，pDvC1 和 pDvC2 在多年生簇毛麦染色体的着丝粒区域上有强烈的杂交信号。用它们杂交硬 粒小麦-二倍体簇毛麦双二倍体（AABBVV），结果显示在所有染色体的着丝点区 域均有信号出现，但是，在小麦染色体着丝粒附近区域的荧光信号强度明显弱于 簇毛麦染色体着丝粒附近区域的信号。这说明了 Ty3-gypsy 型反转录转座子在簇毛 麦 物种 的 着 丝 粒 区 域 有 明 显 的 扩 增 。 而且 我 们 对 中 间 偃 麦 草 （ Thinopyrum intermedium）进行原位杂交，结果发现在中间偃麦草中有 6 条染色体的着丝点有 显著扩增，这也与我们以前认为簇毛麦属与偃麦草属的亲缘关系较近的结果相吻 合。 根据重复序列 pDvC1，我们设计了一对 SCAR 引物标记，对大量的小麦族物 种进行 PCR 扩增检验。结果表明这对引物可以识别含簇毛麦染色体的物种，同时 也可以鉴定出小麦-多年生簇毛麦易位系中簇毛麦着丝粒序列的导入。 本研究获得的簇毛麦染色体着丝粒特异重复序列，对深入研究小麦族物种重 复序列的演化具有重要的参考价值。 关键词：着丝粒，荧光原位杂交，簇毛麦，重复序列，Ty3-gypsy 反转录转座子 I ABSTRACT ABSTRACT Dasypyrum （also named Haynaldia）as one of important related genus of wheat， which have two specieses，D. villosum（2n = 2x = 14, VV）mainly distributed from the Mediterranean and Southwest Asia and D. breviaristatum(2n = 4x = 14, VbVbVbVb) are perennial allogamous species restricted to two mountainous regions in northwest Africa. The genus Dasypyrum are important sources for improving the genetic variability of bread wheat. The genus contains a large number of genes for resistance to powdery mildew, stripe rust resistance, eyespot resistance and spindle streak mosaic virus resistance, and high seed protein content, which will be useful for quality and yield improvement in wheat breeding program. Two repetitive sequences of 920bp and 1003 bp, named pDvC1 and pDvC2, were isolated from Dasypyrum brevaristatum (Vb genome) by PCR analysis. BLAST searches revealed that both pDvC1 and pDvC2 was high homology to a part of Ty3-gypsy retrotransposon Cerebra gag-pol polyprotein gene. Fluorescence in situ h