肠三叶因子与谷氨酰胺对烧伤后肠道谷氨酰胺转运能力影响的实验分析-外科学(整形)专业论文.docxVIP

1 1 肠三叶因子与谷氨酰胺对烧伤后肠道谷氨酰胺转运能力 影响的实验研究 摘 要 目的： 观察肠三叶因子(intestinal trefoil factor , ITF)及谷氨酰胺(glutamine，Gln)对烧 伤后肠道谷氨酰胺转运能力的影响并探讨其可能的机制。 方法： 1.体内试验：按随机数字表将 160 只 SD 大鼠随机分为正常对照(C)组，烧伤对 照(B)组，烧伤+ITF 治疗(I)组，烧伤+Gln 治疗(G)组。C 组只给予麻醉和剃毛，不 予烧伤；B 组给予 94℃水烫伤 18 秒，造成 30%体表面积Ⅲ度烧伤。伤后各组均给 予正常饮食及饮水；I 组于烧伤后 6h 后灌胃给予 ITF(1mg/kg.d)，G 组于烧伤后 6h 后灌胃给予 Gln(1g/kg.d)，每天给药 2 次，B 组灌胃等体积生理盐水，每天 2 次。 观察烧伤后(post burn day, PBD)1、3 及 5 天各项指标的变化。 (1) 采用 Mg2+ 沉淀法 制备肠刷 状缘膜囊 (BBMV) ，通过检测 穿越 BBMV 的 [3H]-Gln的放射性强度，计算出BBMV转运Gln的速率。 (2)采用黏膜刮取漂洗法分离肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC)，通过检 测穿越IEC的[3H]-Gln的放射性强度，计算出IEC转运Gln速率。 (3)采用免疫印迹(Wb)法检测BBMV 中Gln转运载体ASCT2 及B0AT1 的蛋白 含量变化。 2.体外实验：体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞株 IEC-6，建立细胞缺氧模型， 实验分为常氧对照组，单纯缺氧组，缺氧＋ITF 治疗(I)组，缺氧＋Gln 治疗(G)组。 采用 Wb 法检测 IEC-6 细胞中的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶 A 羧化 酶(ACC)的蛋白含量及其磷酸化水平。 结果： 1.烧伤后BBMV及IEC对Gln的转运能力呈现先低后高的变化趋势。BBMV中 Na+依赖性Gln转载体的转运速率在伤后第 1 天下降了 47%，3 天及 5 天较伤前有所 增加，增幅分别为 18%和 14%，非Na+依赖性Gln转运速率在伤后第 1 天下降了 32%， 3 天及 5 天分别增加 16%及 2%；大鼠IEC中Na+依赖性Gln转运速率在烧伤后 1、3、 PAGE PAGE 2 5 天变化不明显，增幅小于 12%，非Na+依赖性Gln转运速率分别增加了 11%、38% 及 30%。 2.给予Gln后BBMV及IEC对Gln转运速率明显增加。与B组相比，G组BBMV中 Na+依赖性Gln转运速率在伤后 1、3 及 5 天增幅分别为 76%、73%及 23%，非Na+依 赖性Gln转运速率增幅分别为 62%、66%及 21%；IEC中Na+依赖性Gln转运速率在 伤后 1、3 及 5 天增幅分别为 43%、44%及 31%，非Na+依赖性Gln转运速率增幅分 别为 6%、39%及 63%。 3.给予ITF后BBMV及IEC对Gln转运速率明显增加。与B组相比，I组BBMV中 Na+依赖性Gln转运速率在伤后 1、3 及 5 天增幅分别为 30%、12%及 32%，非Na+依 赖性Gln转运速率增幅分别为 25%、6%及 64%；伤后大鼠IEC中由Na+依赖性Gln转 运速率在伤后 1、3 及 5 天增幅分别为 14%、21%及 31%，非Na+依赖性Gln转运速 率增幅分别为 7%、15%及 37%。 ４.烧伤后BBMV中ASCT2 蛋白含量变化不明显，B0AT1 蛋白含量在伤后 1-5 天均明显下降。与B组相比，给予Gln后ASCT2 蛋白含量变化不明显，B0AT1 蛋白 含量在 1-5 天明显增高，分别为B组的 1.57、2.37 及 2.38 倍；给予ITF后ASCT2 蛋 白含量分别为B组的 1.41、2.33 及 1.78 倍， B0AT1 则分别为B组的 1.22、1.78 及 1.15 倍。 5.缺氧条件下 AMPK 及 ACC 蛋白含量未发生明显改变，但其磷酸化水平明显 增高。 与单纯缺氧组相比，给予 ITF 后 AMPK 及 ACC 蛋白含量均未见显著变化， 但其磷酸化 p-AMPK 及 p-ACC 蛋白含量均明显提高；给予 Gln 后无论是 AMPK 含量还是其磷酸化水平均未发生明显变化(P＞0.05)。 结论： 1. 烧伤后 BBMV 及 IEC 对 Gln 转运速率未发生显著变化，给予外源性 Gln 或 ITF 能促进 BBMV 及 IEC 对 Gln 的转运。 2. ITF能显著增加BBMV中ASCT2 及B0AT1 蛋白含量；Gln对B0AT1 蛋白合成 具有促进作用，但对ASCT2 的影响不明显。 3. 缺氧能够激活 A