查尔酮衍生物抑制人神经母细胞瘤细胞增殖及迁移作用的机制研究-药理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 A thesis submitted to Zhengzhou University for the degree of Master Anti-proliferation and anti-migration effects of Chalcone derivative on human neuroblastoma cells By Liu JunJu Supervisor: Prof. Zhang Qi Pharmacology School of Pharmaceutical science May, 2016 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 摘要 摘要 摘 要 背景与目的：神经母细胞瘤是起源于神经外胚层的原始神经嵴细胞的原始肿瘤， 是继白血病、脑瘤和恶性淋巴瘤之后居于儿童第 4 位的肿瘤，占所有儿童恶性 肿瘤的 8%-10%。至今，尚无十分有效的治疗方法。我们对查尔酮衍生物抗肿瘤 活性进行筛选，然后观察了 C37 抑制神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 增值活性及迁 移，并初步探讨了其中的分子机制。 方法：本文利用 CCK-8 法检测查尔酮衍生物 C37 对各种肿瘤细胞的增殖抑制作 用并进一步检测 C37 对人神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 增殖抑制的影响。利用流 式细胞术检测 C37 对人神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 周期和凋亡的影响。Western blot 检测 C37 对 SH-SY5Y 细胞凋亡相关蛋白的影响。另外，我们还用划痕实验 法检测查尔酮衍生物 C37 抑制 SH-SY5Y 细胞的迁移的作用，并用免疫印迹法检 测 C37 对 SH-SY5Y 细胞迁移相关蛋白表达的影响。 结果：我们对合成的多种查尔酮衍生物抑制 SH-SY5Y、MGC-803、SK-N-SH 细 胞增值活性进行了初步筛选，发现衍生物 C37 对 SH-SY5Y 细胞的活性最好，其 IC50 值为 1.42μmol·L-1。进一步研究发现 C37 对 SH-SY5Y 细胞的增值抑制呈浓 度依赖性和时间依赖性。其中，C37 作用 SH-SY5Y 细胞 24 h，48 h 和 72 h 后的 半数抑制浓度（IC50）分别为 2.5 μmol·L-1，1.5 μmol·L-1，0.8 μmol·L-1。流式细 胞术结果显示不同浓度的查尔酮类似物 C37 作用 24 h 后，SH-SY5Y 细胞的 G1 期升高，S 期下降。结果表明查尔酮类似物 C37 将 SH-SY5Y 细胞周期阻滞于 G1 期。随着 C37 浓度的增加，SH-SY5Y 细胞凋亡率不断增加。这说明查尔酮类似 物 C37 能诱导 SH-SY5Y 细胞产生凋亡。Western blot 结果显示随着 C37 浓度的增 加，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达量逐渐降低，促凋亡蛋白 Bax 和 p53 表达量升高，而 凋亡相关蛋白 Erk 的磷酸化程度逐渐降低，p38 蛋白磷酸化程度却逐渐上升。凋 亡相关蛋白 caspase-3, caspase-9 蛋白表达量逐渐升高，本结果与流式细胞术结果 想吻合，说明，C37 能够促进 SH-SY5Y 细胞产生凋亡。划痕实验结果显示 C37 作用于 SH-SY5Y 细胞，细胞迁移能力明显降低，说明查尔酮衍生物 C37 能明显 抑制 SH-SY5Y 细胞的迁移能力。另外，western blot 结果显示随着 C37 浓度的增 加，基质金属蛋白酶 MMP-2、MMP-9 的表达量逐渐降低，说明查尔酮衍生物 C37 是通过调节基质金属蛋白酶的表达量进而调节 SH-SY5Y 细胞的迁移能力。 I 结论：查尔酮衍生物 C37 能明显抑制 SH-SY5Y 细胞的增殖能力。其机制可能是 通过调节凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax、p53、caspase 家族、