多孔陶瓷材料固定化脂肪酶的制备及应用-生物工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Thesis Submitted to Hebei University of Technology for The Master Degree of Biochemical Engineering THE PREPARATION AND APPLICATIONS OF LIPASE IMMOBILIZED ON POROUS CERAMIC MONOLITHS By Li Hongwu Supervisor: Prof. Gao Jing May 2015 This work was supported by the National Nature Science Foundation of China (Nos., the Application Basic Research Plan Key Basic Research Project of Hebei Province ), the Science and Technology Research Key Project of Higher School in Hebei Province (YQ2013025), the Natural Science Foundation of Tianjin (13JCYBJC18500), and the Natural Science Foundation of Hebei Province (No. E2010000058). 河北工业大学硕士学位论文 摘 要 多孔陶瓷材料整体柱具有多级孔径通道，其孔道主要分布在 30-100 μm 和 10-200 nm，其独特的孔道结构在为固定化酶提供了良好的微环境的同时，又有效的降低了整 体柱的压降。本论文以多孔陶瓷材料整体柱为载体固定化脂肪酶 Candida sp. 99-125， 采用两种修饰方法对多孔陶瓷材料整体柱进行修饰，修饰的载体表面带有官能基团， 可将脂肪酶共价连接在载体表面。对制得的固定化酶的活性及热稳定性作了进一步的 研究，并将固定化酶应用于生物柴油和凝油剂的制备，主要研究内容如下： 利用硅烷偶联剂 APTES 和 GPTMS 修饰的多孔陶瓷材料整体柱为载体固定化脂 肪酶 Candida sp. 99-125。对固定化条件进行了优化，结果发现氨基修饰的载体 Amino-PCM 的酶蛋白负载量为 5.7 mg/g，固定化酶 Lipase@Amino-PCM 的比酶活可 达 12.3 U/g；环氧基修饰的载体 Epoxy-PCM 的酶蛋白负载量为 6.4 mg/g，固定化酶 Lipase@Epoxy-PCM 的 比 酶 活 可 达 15.7 U/g 。 Lipase@Amino-PCM 和 Lipase@Epoxy-PCM 在水相和有机相中均表现出 良好的热稳定性。将 Lipase@Amino-PCM 和 Lipase@Epoxy-PCM 用于催化制备生物柴油，二者均展现出较 好的重复利用性和稳定性。 利用多巴胺修饰的多孔陶瓷材料整体柱为载体固定化脂肪酶 Candida sp. 99-125。 对固定化条件进行了优化，结果发现酶浓度为 30 mg/mL，固定化时间为 5 h，多巴胺 修饰的载体 PDA-PCM 的酶蛋白负载量为 12.6 mg/g，固定化酶 Lipase@PDA-PCM 的 比酶活可达 16.6 U/g；Lipase@PDA-PCM 在水相和有机相中均表现出了良好的热稳定 性，Lipase@PDA-PCM 用于催化制备生物柴油，展现出较好的重复利用性和稳定性。 利用脂肪酶 Candida sp. 99-125 催化甘露醇和脂肪酸乙烯酯转酯反应，成功制备 出五种不同侧链长度的凝油剂 Man-6、 Man-8、 Man-10、 Man-12 和 Man-14，产 率分别为 81%、82%、70%、59%和 61%，且 Man-6、Man-8、Man-10、Man-12 和 Man-14 都具有凝胶甲苯、汽油、柴油、橄榄油和食用豆油的能力。凝油剂 Man-8 在 有水存在的环境中仍可达到较理想的凝油效果，90%的油相可被回收。固定化酶 Lipase@Amino-PCM 、Lipase@Epoxy-PCM 和 Lipase@PDA-PCM 催化制备凝油剂 Man-8 时的最终产率分别为 78%、80%和 80%，并表现出了较理想的重复使用性能， 这些固定化酶还可用于填充床反应器制备凝油剂。 关键词：固定化脂肪酶，整体柱，凝油剂，脂肪酶 Candida sp. 99-125，生物柴油 I 多孔陶瓷材料固定化脂肪酶的制备及应用 II 河北工业大学硕士学位论文 ABSTR