多年生簇毛麦物种PSY基因的克隆与进化分析-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 簇毛麦属(Dasypyrum，又称 Haynaldia)在植物分类上属禾本科(Gramineae)小 麦族(Triticeae)的小麦亚族(Triticinae),是小麦的近缘属之一。具有抗小麦叶锈病、 秆锈病和白粉病等多种病害,是改良小麦的重要三级基因源。簇毛麦属包含二倍体 一年生簇毛麦（D. villosum）、二倍体多年生簇毛麦（D. breviaristatum）和四倍体 多年生簇毛麦（D. breviaristatum）三个物种。目前，对一年生簇毛麦的研究比较 多，大量研究主要集中在对抗白粉病基因 Pm21 研究和利用上。相比之下，对目前 全世界种质库仅存一份的四倍体多年生簇毛麦这一珍稀物种研究很少。鉴于此， 我们利用合成的小麦-多年生簇毛麦的双二倍体与小麦进行杂交回交，获得了一系 列的小麦-多年生簇毛麦渐渗系开始了将多年生簇毛麦优异性状向小麦的导入工 作。 小麦与多年生簇毛麦杂交之后，小麦背景中多年生簇毛麦染色质的检测就成 了小麦染色体工程育种的重要内容之一。而根据编码基因设计引物后获得的 SCAR 分子标记与根据 DNA 序列基础上的 RAPD 标记因为操作简单、准确和快捷等优点 被广泛的运用到小麦育种中。本论文就根据小麦八氢番茄红素合成酶（PSY）基因 设计 SCAR 引物对多年生簇毛麦与对照小麦进行扩增，然后对小麦-多年生簇毛麦 渐渗系进行扩增验证，获得了的可以跟踪多年生簇毛麦 PSY 基因的分子标记；与 此同时，我们还筛选了大量 RAPD 引物，获得了 1 个多年生簇毛麦基因组 RAPD 标记。具体研究结果如下： 1、根据已发表的小麦族植物 PSY 基因序列的保守区设计引物，通过 PCR 扩增获 得了多年生簇毛麦 PSY 基因的全序列，该基因全长为 2960bp，包含 6 个外显 子和 5 个内含子，被命名为 DbPSY1。序列比对分析表明 DbPSY1 与小麦族其 它植物的 PSY 基因有较高的同源性。将 DbPSY1 与禾谷类植物 PSY 基因进行 遗传聚类分析，结果表明，DbPSY1 与偃麦草以及大麦的 PSY 基因亲缘关系最 近而与小麦相对较远。根据序列比对结果设计多年生簇毛麦 DbPSY1 基因特异 引物，建立了可以用于跟踪携带 PSY 基因的多年生簇毛麦染色体片段的分子标 记。 2、用 240 条随机引物对多年生簇毛麦、二倍体簇毛麦和 5 份小麦进行 RAPD 分析， 检测到引物 J10 在簇毛麦和小麦间在 500bp 处有明显多态性，克隆测序结果确 I 证簇毛麦基因组特异片段长度为 450bp，命名为 J10450。NCBI 比对结果显示 J10450 可能是一个长末端反转录转座子的部分序列。该片段在中国春-簇毛麦附 加系（CSDA1V-CADA7V）中出现。进一步的研究结果表明，J10450 与簇毛麦 的居群无关。用 J10 对多年生簇毛麦的大量渐渗系进行分析，结果显示 J10450 可以作为检测小麦背景中多年生簇毛麦染色质的分子标记。 综上，本研究建立的 SCAR 标记和 RAPD 标记均可以作为多年生簇毛麦特异分子 标记检测导入到小麦背景中的多年生簇毛麦染色质以此来辅助小麦育种工作。 关键词：多年生簇毛麦, PSY 基因, SCAR 标记, RAPD 标记，进化 II Abstract Abstract Abstract Genus Dasypyrum belongs to Triticinae of Triticeae, containing a large quantity of useful resistant genes, such as wheat leaf rust resistant gene, wheat stem rust resistant gene and powdery mildew resistant gene, et al. It is one of the most important third level gene pool for wheat improvement. Dasypyrum includes three species, diploid annual D. villosum (L.) Candargy, diploid perennial D. breviaristatum (Lindb. F.) Frederiksen and tetraploid perennial D. breviaristatum (Lindb. F.) Frederiksen. At present, researches on Genus Dasypyrum are almost concentrated on D.