煤工尘肺大鼠模型对认知功能及脑细胞超微结构的影响的研究.docVIP

煤工尘肺大鼠模型对认知功能及脑细胞超微结构的影响的研究 　　[摘要] 目的 通过建立煤工尘肺wistar大鼠模型,探讨煤工尘肺导致慢性缺氧对认知功能及脑细胞超微结构的影响。方法 将20只wistar大鼠随机分为尘肺组和对照组,尘肺组灌入煤尘生理盐水悬液1mL,对照组灌入生理盐水悬1mL,建立尘肺模型8周后,通过Morris 水迷宫实验检测其学习和记忆能力,并在实验结束后取肺组织和脑组织做HE染色病理切片,观察肺组织和脑组织结构的变化。结果 水迷宫实验中尘肺组大鼠学习记忆能力下降,神经元破坏。结论 ①尘肺可导致大鼠认知功能下降;②尘肺可致大鼠神经元超微结构改变。 　　[关键词] 尘肺;慢性缺氧;认知功能;脑细胞超微结构 　　[中图分类号] R135.2 [文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2010)10-11-02 　　煤工尘肺(coal workers pneumoeoniosis,CWP)是指煤矿各工种工人长期吸入生产环境中的粉尘,所引起肺部尘肺病变的总称。尘肺患者由于长期吸入生产性粉尘,损坏了呼吸道黏膜,破坏了其防御功能,减弱了气管对异物的消除能力,肺部广泛纤维化,间质病变,肺泡通气换气功能障碍,使肺功能受损,导致低氧血症[1]。低氧血症会导致多器官的损害,尤其是氧需求量较大的中枢神经系统。缺氧引起记忆功能障碍已得到多方面临床的证实,但是还没有尘肺引起认知障碍方面的研究。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　①动物:20只wistar雄性大鼠,体重(190±20)g,由河北医科大学动物中心提供;②Morris 水迷宫(山西医科大学公共卫生学院);③煤尘颗粒(晋煤集团生产的无烟煤颗粒);④光学显微镜(NIKON ECLIPSE E600,山西医科大学寄生虫教研室);⑤计算机及显微图像分析系统(BI2000,成都泰盟科技有限公司)。 　　1.2方法 　　1.2.1动物分组与模型的建立适应性饲养一周后,20只wistar大鼠随机分为尘肺组(CWP组)和对照组。用10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔麻醉,然后行气管插管,将颗粒直径5μm的煤粉尘配成50g/L的生理盐水悬液,灌入煤尘生理盐水悬液1mL,对照组灌入1mL生理盐水然后继续饲养。 　　1.2.2Morris水迷宫实验8周后应用Morris水迷宫系统测定大鼠学习记忆能力。①定位航行实验(place navigation):实验前一天预先将大鼠置于水迷宫中自由游泳30min,让其适应水迷宫环境。在学习过程中,大鼠连续训练4d,每天分上、下午两个时段,每个时段训练2次,间隔为60min。每次实验大鼠在4个不同象限中将头朝池壁放入水池,每天次序不同,任其游泳,直至找到平台。60s内寻找到隐藏在水面下平台的时间(逃避潜伏期,escape latency)被记录下来,并允许大鼠在平台上停留10s以达到强化记忆效果,如果大鼠在60s 内未到达平台,逃避潜伏期以60s 记录,并由实验者用杆子将其引至平台停留30s。每次实验后立即用毛巾将大鼠抹干。此项反映大鼠的学习能力。②空间探索实验(spatial probe):实验第5天进行空间探索实验,撤除平台,将大鼠任意选一个入水点放入水中,记录其在2min中内的游泳轨迹,分别计算其跨越目标象限内的游泳时间占整个游泳时间的百分率、跨越平台次数,此项反映大鼠的空间记忆能力。 　　1.2.3形态学实验检测实验结束时处死大鼠,取肺组织和脑组织做HE染色病理切片,观察肺组织和脑组织结构的变化。 　　1.3统计学处理 　　所有数据应用统计软件SPSS13.0 进行统计学分析。 　　2结果 　　2.1Morris水迷宫测试 　　2.1.1Morris水迷宫学习成绩(定位航行实验)CWP组的逃避潜伏期明显长于对照组(P0.05)。见表1。 　　2.1.2Morris 水迷宫记忆成绩CWP组的穿越平台次数(2.6±1.32)次,较对照组显著减少[(5.1±2.10)次,P0.01];CWP组在跨越目标象限时间占整个游泳的时间百分率(25.46±1.96)%也较对照组显著减少[(35.24±2.73)%,P0.01],见表2。 　　2.2形态学实验结果 　　 ①肺组织病理形态学染尘8周可见炎细胞浸润增加,吞噬了煤尘的肺泡巨噬细胞增加及煤尘聚集形成的煤斑或结节增多,病灶肺气肿明显,可见少量肺纤维化形成,见图封三1,2。②脑组织病理形态学观察:光镜下染尘8周可见胶质细胞吞噬神经元,神经元坏死、减少,筛网状软化灶,见图封三3,4。 　　3讨论 　　煤工尘肺是职业病的常见病,严重危害劳动者的健康,由于长期吸入生产性粉尘,损坏了呼吸道黏膜,破坏了其防御功能,减弱了气管对异物的消除能力,肺部广泛纤维化,临床上常出