发光细菌法检测海洋污染生物毒性 的标准化与现场应用研究-化学工程与技术专业论文.docx

青岛科技大学研究生学位论文 发光细菌法检测海洋污染生物毒性 的标准化与现场应用研究 摘 要 海洋污染生物毒性 的检测是海洋 环 境 保 护 的 重要内容， 发光细菌法 （luminescent bacteria test, 简称 LBT）是一种综合检测判定毒性物质浓度与生物 效应关系的生物毒性检测技术，能够全面地反映各种毒性物质对环境的综合毒性 效应。本文针对 LBT 在海洋环境中应用的标准化问题，以经遗传改造的不动杆菌 Acinetobacter sp. Tox2 和 Acinetobacter sp. RecA 作为研究对象，开展了以下主要 研究内容： （1）以 Tox2 菌株为受试生物对 4 种重金属和 2 种石油烃的急性毒性进行了 检测，并通过传统方法诸氏鲻虾虎鱼的暴露试验对其结果进行了验证。Hg2+、Zn2+、 Cu2+、Cd2+和原油水容纳组分对 Tox2 的 EC50 分别为：0.12 mg/L、71.81 mg/L、 0.68 mg/L、43.67 mg/L、2.01 mg/L，对虾虎鱼的 LC50 分别为：0.14 mg/L、107.73 mg/L、3.23 mg/L、39.83 mg/L、2.69 mg/L，柴油水容纳组分对虾虎鱼的 LC50 为 4.96 mg/L。结果显示：两者检测结果匹配度较好，但在急性毒性响应时间上发光 细菌法（30 min）要优于传统的鱼类暴露实验（96 h）。 （2）通过正交试验，结合石油烃含量分析得到了检测沉积物生物毒性的最 优预处理方法：用模拟海水在 25℃提取 0.5 h，固液比=1:4。采用该方法对实地修 复过程中溢油污染的海洋岸滩沉积物样品进行预处理，并分别利用 Tox2 菌株和 RecA 菌株评价了不同时间下样品急性毒性和遗传毒性的变化规律。结果显示， 修复区和自然风化区沉积物样品的急性毒性均为无毒( N  HgCl2 为负值)，但遗传毒性 差异较大。从不同站位来看，同一时间修复区样品遗传毒性小于未修复区样品。 从时间上来看，遗传毒性随时间的推移而降低，且修复区样品降低更快。修复区 初始样品（第 1 天）的遗传毒性为高毒（NMMC 为 1.65 mg/L)，第 14 天样品降至 中毒(NMMC 为 0.17 mg/L)，第 30 天样品的降至无毒（NMMC 为负值）。自然风化区 初始样品的遗传毒性为高毒(NMMC 为 1.41 mg/L)，第 60 天样品开始出现中毒(NMMC 为 0.18 mg/L)，第 120 天样品降至无毒（NMMC 为负值）。遗传毒性的检测结果与 PAHs 的含量有相同的递减趋势。 （3）利用脱脂牛奶和 NaCl 溶液（或 LB 培养基）构成双因素多梯度的冷冻 干燥保护剂，分别探究 Tox2 菌株和 RecA 菌株的最佳冷冻干燥条件，得到二者的 最佳冻干保护剂条件分别为：24％脱脂牛奶、0.5% NaCl 溶液和 24％脱脂牛奶、 NaCl 含量为 0.5%的 LB。冻干后 Tox2 菌株和 RecA 菌株的相对发光强度分别大 I 发光细菌法检测海洋污染生物毒性的标准化与现场应用研究 于 88.58%、85.13%。用冻干前后的 Tox2 菌株和 RecA 菌株分别对 HgCl2 和 MMC 的生物毒性进行了检测。结果显示，两株菌冻干前后的发光曲线趋势相同，在相 同物质浓度下的发光抑制率、诱导率基本相当。其中 HgCl2 对 Tox2 菌株冻干前后 的 EC50 相等（均为 0.11 mg/L），MMC 对 RecA 菌株冻干前后的 EC50 差别较小（分 别为 0.92 mg/L、1.02 mg/L）。表明所建立的冻干技术可用于发光细菌的长期保存， 且不影响生物毒性检测效果。 关键词 发光细菌 诸氏鲻虾虎鱼 急性毒性 遗传毒性 沉积物 冻干菌粉 II 青岛科技大学研究生学位论文 STANDARDIZATION AND APPLICATION OF LUMINESCENT BACTERIA TEST IN THE BIOTOXICITY DETECTION OF MARINE POLLUTANTS ABSTRACT Biotoxicity test of marine pollutant is an important part of the marine environmental protection. Luminescent bacteria test (LBT) can be used to confirm the relationship between the concentration of toxicants and reaction of bacteria, and it can reflect the integ