二价阳离子门控CaCC通道分子机制的研究-生物物理专业论文.docxVIP

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二价阳离子门控CaCC通道分子机制的研究-生物物理专业论文

原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师指导下,进行研究工作所取得的成 果。除文中已经注明引用的内容外,本学位论文不包含任何他人或集体已经发表的作品内 容,也不包含本人为获得其他学位而使用过的材料。对本论文所涉及的研究工作做出贡献 的其他个人或集体,均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本 人承担。 学位论文作者签名: 日期: 关于学位论文版权使用授权的说明 本人完全了解河北工业大学关于收集、保存、使用学位论文的以下规定:学校有权采 用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文;学校有权提供本学位论文全文或者部 分内容的阅览服务;学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索、交 流;学校有权向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版。 (保密的学位论文在解密后适用本授权说明) :学位论文作者签名: 日期: : 导 师 签 名 日期: 二价阳离子门控 CaCC 通道分子机制的研究 摘 要 作为细胞膜上最重要的跨膜蛋白,离子通道在各种生物体的生命活动中发挥着重要的 生理功能,离子通道通过有序的开放和关闭完成细胞内外的离子交换,调节膜电位变化, 进一步影响细胞的功能,引起生物反应。 离子通道的种类很多,如钠通道、钾通道、钙通道、氯通道等。本篇论文的研究对象 是氯通道中的一个重要成员-钙激活氯通道(CaCC)。CaCC 广泛分布在诸多生物体的多 种组织内,发挥重要的生理功能,如上皮细胞中分泌蛋白和盐的转运、平滑肌收缩的维持、 嗅觉和味觉信号转导、心肌细胞动作电位的产生和复极化、神经元兴奋性的调节等。然而, 由于先前缺乏特异性阻断剂和对 CaCC 通道分子基础的认知,很难区分 CaCC 通道介导的 氯离子电流和其他阳离子电流及非钙依赖性氯离子电流,使得有关 CaCC 通道的研究远远 滞后于其他离子通道研究。尽管钙离子依赖性激活机制是 CaCC 通道的显著电生理特性, 但是在 CaCC 通道内并没有发现传统的钙离子结合位点。直至目前,人们仍然没有明确钙 离子结合位点和准确理解钙离子激活 CaCC 通道的分子机制。因此,对 CaCC 钙离子依赖 性门控机制的研究具有重要的生理学意义。 2008 年相继有三个实验室发现 TMEM16A(亦称 ANO1)可能是 CaCC 通道的分子 基础,这使得进一步对 CaCC 通道研究成为可能。本文的研究工作旨在通过系统的研究、 比 较 不 同 二 价 阳 离 子 作 用 于 TMEM16A 通 道 的 激 活 过 程 , 揭 示 钙 离 子 激 活 CaCC/TMEM16A 通道的微观机制。我们采用膜片钳内向外和全细胞两种记录模式对稳转 TMEM16A 通道的细胞系进行了研究,得出以下结论: 1、胞内钙离子可以激活稳转于 HEK293T 细胞系的 TMEM16A 通道,产生外向整流 电流,该电流可被 NFA 完全抑制。这与天然的 CaCC 通道性质相似。 2、胞内锶离子可以激活 TMEM16A 通道,该激活电流可被 NFA 完全抑制,但是锶 离子与通道的亲和力要弱于钙离子。 3、胞内镍离子也可以激活 TMEM16A 通道,并且激活电流可被 NFA 完全抑制,其 激活作用与锶离子相当,不如钙离子。 4、胞内锌离子则不能激活 TMEM16A 通道,但是可以抑制钙离子激活的 TMEM16A i 通道电流。 有文献报道,与 TMEM16A 同家族的 TMEM16B 也可能是 CaCC 通道的分子基础, 锶离子可以激活 TMEM16B 通道。我们的研究结果首次表明,锶离子和镍离子都可以从 胞内侧激活 TMEM16A 通道,这进一步加深了人们对于 CaCC 通道的认识。我们有关胞 内侧的锌离子抑制 TMEM16A 的实验结果,也是对文献报道胞外侧锌离子抑制内源性 CaCC 通道的有益补充。 关键词:TMEM16A,钙离子,锶离子,镍离子,锌离子,内向外记录模式, 全细胞记录模式 MOLECULAR MECHANISMS OF DIVALENT CATIONS REGULATING CACC CHANNELS ABSTRACT It is well known that ion channels are the most important transmembrane proteins and play crucial roles in diverse physiological processes of various species. By orderly controlling opening and closing, ion channels transfer ions betw

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