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白木香丙二烯氧化物环化酶基因AsAOC1的克隆与表达-药学学报
药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 18, 53 (3): 467 475 ·467 ·
木香丙二烯氧化物环化酶基因 (AsA OC1) 的克隆与表达分析
2# 3# 2 2* 1*
董先娟 , 李铁铮 , 冯莹莹 , 王晓晖 , 高博闻
(1. 包头医学院, 内蒙古 包头 014060; 2. 北京中医 大学中药学院中 现代研究中心, 北京 100029;
3. 北京中医药大学中药学院, 北京 102488)
摘要: 丙二烯氧化物环化酶 (allene oxide cyclase, AOC) 是茉莉酸生物合成途径中的一个关键酶, 在植物防
御反应中发挥重要作用。本研究根据白木香转录组高通量测序结果设计引物扩增, 利用RT-PCR 技术从白木香中
首次克隆得到 1 个AOC 基因, 命名为AsAO C1, 并进行生物学信息 析、原核表达和纯化、组织特异性 析及
非生物胁迫和激素诱导表达分析。白木香AsAO C1 基因的开放阅读框 (ORF) 长753 bp, 编码251 个氨基酸, 其
蛋白 子质量是27.46 kD 。生物学信息分析表明AsAOC1 蛋白包含 1 个保守的allene_ox_cyc 结构域, 系统进化
树显示AsAOC1 蛋白与川桑 (Morus notabilis) AOC 蛋白具有较高的同源性。构建原核表达载体pET28a-AsAOC1
并在大肠杆菌BL2 1(DE3) 菌株中成功表达AsAOC1 重组蛋白, 利用Ni2+亲和色谱纯化得到可溶性AsAOC1 重组
蛋白。实时荧光定量PCR 检测结果表明AsAOC1 基因在茎中表达量最高, 根与茎尖次之, 叶中表达量最低。盐、
干旱、低温以及重金属胁迫均能够诱导白木香愈伤组织中 AsAOC1 基因表达; 茉莉酸甲酯、水杨酸、赤霉素和
脱落酸诱导后, 愈伤组织中 AsAOC1 基因的表达量明显上升。本研究为进一步研究茉莉酸途径在白木香结香机
制和植物防御反应中作用奠定基础。
关键词: 白木香; 丙二烯氧化物环化酶; 茉莉酸; 生物学信息分析; 原核表达; 表达分析
中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 18) 03-0467-09
Cloning and expression analysis of allene oxide cyclase
gene from Aqu ilaria sinensis
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DONG Xian-j uan , LI Tie-zheng , FENG Ying-ying , WANG Xiao-hui , GAO Bo-wen
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