常见的胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响.ppt

实验一胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 实验目的 1、掌握胰岛素和肾上腺素对血糖水平的调节作用 2、熟悉分光光度计的使用。 二、实验原理 人和动物体内，血糖浓度受各种激素调节而维持恒定。人的正常空腹血糖值3.9-6.1mmol/L(70-110mg/dL) 肾上腺素 胰岛素 葡萄糖的测定原理 无蛋白质血滤液中的葡萄糖在碱性溶液中与硫酸铜共热。 蓝色的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。 氧化亚铜再使磷钼酸还原成钼蓝。 与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可算出葡萄糖的含量。 常见测糖的方法 吴宪-Folin法 苯酚-硫酸法 3，5-二硝基水杨酸法（DNS） 蒽酮-硫酸法 气相色谱法(GC) 液相色谱法（HPLC） 化学法 物理法 三、实验材料 1、 家兔。 2、分光光度计。 3、试剂 草酸钠 50%葡萄糖 肾上腺素 胰岛素 碱性铜试剂 磷钼酸试剂 标准葡萄糖溶液 0.25%的苯甲酸溶液 10%Na2WO4 0.33mol/L H2SO4 四、实验方法 1．动物准备：取正常家兔两只，实验前预先饥饿16 h，称体重(一般为2～3 kg)。 2．取血：耳缘静脉取血，先减去毛，用酒精擦拭兔耳，使其血管充血。再用干棉球擦干，再用粗针头刺破静脉取血2-3ml，放入含抗凝剂的酒杯中，混匀。（抗凝血A1,A2） 3．注射激素后取血： 取饿兔血后，其中一只兔皮下注射胰岛素，剂量按1.5 U/kg体重计算，并记录注射时间。1h后再取血，（抗凝血B1)。取血后立即腹腔或皮下注射50％葡萄糖5ml，以免家兔发生胰岛素性休克而死亡。 另一只兔皮下注射肾上腺素，剂量按0.3 mg/kg体重计算。并记录注射时间。30分钟后再取血。（抗凝血B2) 制备无蛋白血滤液 3.5ml蒸馏水+ 0.1ml 抗凝血 +0.2ml 0.33mol/L硫酸+ 0.2ml 10%钨酸钠 待清澈液出现,将上清液用胶头滴管转移至干燥的试管中。即为无蛋白血滤液 标准管 A1 A2 B1 B2 空白管 标准葡萄糖溶液（mL） 1 一 一 一 一 一 无蛋白质血溶液（mL） 一 1 1 1 1 一 蒸馏水（mL） 一 一 一 一 1 碱性铜试剂（mL） 1 1 1 1 1 1 摇匀，置于沸水浴准确煮8min，取出时切勿摇动，置于水浴中冷却 磷钼酸试剂（mL） 1 1 1 1 1 1 混匀，放置3min 蒸馏水（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 比色测定 将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在620nm处测定吸光值。 操作注意 1、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准确8分钟。 2、冷却时切不可摇动血糖管？ 3、加入磷钼酸后迅速比色？ 4、分光光度计的使用。