第三章-细胞工程教学教案.pptVIP

预想一下，克隆人技术路线？ 三、植物细胞工程 在离体条件下，利用人工培养基对植物器官、组织、原生质体等进行离体培养，使其按照人们的设计，定向长成完整的植株，已达到改良品种或创造新物种，或获得有用物质的过程 植物细胞工程的核心：利用细胞全能性，人为定向调控细胞生长 细胞全能性：一个活细胞具有发育成一个完整个体的潜能 1902年，G. Haberlandt首次提出 1958年，Steward 将胡萝卜韧皮细胞 培养出植株 植物细胞培养 培养基 环境 技术 培养基 无机营养成分： 大量元素 N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素 Fe、B、Mn、Cu、Mo、Zn、Co 有机营养成分： 含N物质：包括维生素和氨基酸 碳源：2-5%的蔗糖溶液，调节渗透压 维生素：VB1、VB6、烟酸、也算、泛酸、生物素 激素：生长素，细胞分裂素和赤霉素 天然有机添加物：椰汁、番茄汁等，促进细胞和组织增殖分化 琼脂 起支持作用 培养基种类 MS培养基 无机盐浓度较高，使用广泛 B5培养基 铵浓度低，适合双子叶尤其是木本植物 White培养基 无机盐浓度低，适于生根 N6培养基 成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高 Nitsch培养基 在MS培养基基础上改进 培养基的配制 先配成母液，使用时稀释 注意防止产生沉淀 铁盐要单独配制 大量元素、微量元素、铁盐、有机物 环境条件 温度 大多数植物组培温度为23-28℃ 湿度 湿度过低使培养基丧失水分，湿度过高易污染 光照 愈伤增殖期黑暗或弱光培养；分化阶段需要光照 渗透压 0.1-0.2 MPa 气体 pH 5.8-6.2 培养技术 1、无菌外植体的获得 外植体：植物组培中用来进行无菌培养的离体材料 2、外植体接种 将无菌外植体移至培养基上进行培养 愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间以后，通过细胞分裂，形成一种排列疏松无规则、高度液泡化、无定形态的薄壁细胞组成的组织。 离体的植物器官、组织或细胞 脱分化（又叫去分化） 愈伤组织（排列疏松而无规则，高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞） 再分化 根或芽等器官 植物体 植物组织培养的基本过程 切取 形成层 诱导愈伤组织 的形成 试管苗的形成 培养室 移栽 脱分化 再分化 无菌接种 ①叶片接种到培养基上 ②产生愈伤组织 ③愈伤组织增殖 ④愈伤组织开始分化 ⑤愈伤组织分化出芽 ⑥培养基中的试管苗 植物组织培养过程示意图 植物细胞融合技术 原生质分离 原生质纯化 原生质活力测定 去壁 原生质的分离 机械法 酶促法 原生质的纯化 植物材料经处理后，混合液中除了完整、未损伤的原生质，还包含未去壁的细胞、破碎的原生质、细胞器等，需要去除杂质获得完整原生质 过滤 离心 漂浮 原生质的活力测定 形态识别 形态、渗透压 相差显微镜观察 细胞质流动、细胞核 荧光显微镜法（FDA法）活细胞发出黄绿色荧光 FDA：荧光素二乙酸酯 酚藏花红染色法 死细胞染色 伊凡蓝染色法 死细胞染色 植物体细胞杂交应用研究 植物细胞器移植 植物细胞器移植是指：从不同植物细胞中分离得到细胞器，再将其导入受体原生质中的过程。 原生质摄取细胞器的机制： 内吞 融合 脂质体包装后融合 细胞器分离 机械法 匀浆 过滤 离心 从原生质体中分离 细胞器摄入 夹层离心法 PEG诱导法 脂质体包装 细胞器移植概况 细胞核移植 叶绿体移植： 1973年 卡尔逊 白化烟草原生质与烟草的叶绿体混合——绿色烟草 叶绿体+鸡卵细胞混合——鸡卵细胞成活7d 线粒体移植 细胞重建 在融合因子介导下，使细胞质体与完整细胞合并，构成核质杂种 植物染色体工程 染色体加倍技术 单倍体育种 染色体非整倍改造 染色体加倍 同源多倍体较二倍体形态更大，代谢活动增强 秋水仙素 破坏纺锤丝形成 1. 人工诱导植物多倍体的意义 多倍体(polyploidy): 植物的性状比原来的二倍体气孔、花、果实和种子比二倍体者为大，叶肉较厚，茎秆也较粗壮 三倍体无子西瓜的培育过程 单倍体育种 单倍体只有一套染色体，每个基因都能显示相应的性状，易发现新产生的突变，可用于研究基因功能及基因剂量效应 获得纯合二倍体 花药培养 花粉培养 异源种属花粉诱导 植物单倍体育种: 由于单倍体只有一套染色体，染色体上的每个基因都能显示相应的性状，所以极易发现所产生的突变，尤其是隐性突变，在表型上可以直接表现出来，所以单倍体是研究基因或基因效应、进行染色体遗传分析的理想实验材料 1）