甜瓜白粉病离体叶片接种的方法的研究.docVIP

甜瓜白粉病离体叶片接种的方法的研究 　　摘要：为了明确新疆吐鲁番地区甜瓜白粉病生理小种，试验采用离体叶片和活体植株2种接种方法，对国际通用的甜瓜白粉病生理小种鉴定的13份鉴别寄主，即MR-l、WMR 29、Iran H、Vedrantais、Edisto 47、Topmark、Nan-tais Oblong、PMR6、PMR5、PMR45、P1124111、P1124112、P1414723进行抗病性鉴定。结果表明，2种鉴定方法在发病率和病情指数上有些差异，但鉴定结果基本一致，初步确定新疆吐鲁番地区的甜瓜白粉病由Podosphaera xanthii的小种l所致。因此，离体叶片接种方法可用于甜瓜白粉病生理小种的鉴别和抗源鉴定。 　　关键词：甜瓜；白粉病；离体叶片；抗性鉴定；种质资源 　　甜瓜（Cucumis melo L）是葫芦科黄瓜属一年生蔓性草本植物。因其栽培周期短、效益高，是致富首选经济作物之一。甜瓜白粉病是甜瓜生产上最常见、最重要的气传病害，从苗期到成株期均可发生，但进入中后期最为严重，主要危害叶片，严重时亦可危害叶柄和茎蔓。还可导致植株冠层减少，单株坐果率降低，发病严重年份可使甜瓜减产50%以上，且甜瓜的成熟度和含糖量也会受到很大的影响。 　　甜瓜白粉病是由子囊菌亚门白粉菌科白粉菌属的真菌侵染所致，甜瓜白粉病菌主要为单囊壳白粉菌（Podosphaera xanthii）和二孢白粉菌（Golorino-myces cichoracearum）。国内有关甜瓜白粉病病原菌鉴定结果均表明我国甜瓜白粉病是P.xanthii所致，王娟等嘲初步确定北京地区瓜类蔬菜白粉病由P.xanthii所致，张学军等报道新疆甜瓜白粉病由P.xanthii所致。甜瓜白粉菌的小种多，分化快，至今已发现P.xanthii存在11个生理小种，即：0、1、2U.S、2France、3、4、5、N1、N2、N3、N4 E4-61。Kuzuva等将N1和N2定名为小种6和小种7；G cichoracearum的生理小种有2个，即小种0和小种1。 　　防治甜瓜白粉病常用的方法是化学防治法，但化学防治不仅成本高、效率低，还会引起病原菌的抗药性以及环境污染等问题。多年的防治实践表明，利用抗源培育抗病品种则是防治甜瓜白粉病最经济、最有效的措施。培育抗病品种的关键步骤之一是生理小种的明确和抗病性的鉴定。由于白粉菌是一种专性寄生菌，只能在活体寄主上存活，目前甜瓜白粉病生理小种的鉴定多采用国际通用的13份鉴别寄主在其苗期使用分生孢子悬浮液喷雾接种法。而苗期喷雾接种受温度和湿度等外界环境因素的影响较大，常造成鉴定结果不稳定，不能完全反映抗病育种材料的抗性程度。多项研究表明，利用植株离体叶片进行室内抗性接种鉴定，具有快速、准确、筛选量大以及不受季节限制等优越性。而甜瓜白粉病利用离体叶片接种方法鲜有报道。本研究主要探索甜瓜白粉病离体叶片的接种方法，以期为甜瓜白粉病生理小种的鉴别和抗源材料的鉴定提供理论依据。 　　1.材料与方法 　　1.1材料 　　当地易感白粉病甜瓜品种‘巴登’的叶片。鄯善当地温室采集的白粉菌。国际通用的甜瓜白粉病生理小种鉴定的一整套13份鉴别寄主，即MR-1、WMR 29、Iran H、Vedrantais、Edisto 47、Top-mark、Nantais Oblong、PMR6、PMR5、PMR45、P1124111、P1124112、P1414723。所有供试材料均由新疆维吾尔自治区葡萄瓜果研究所提供。离体接种试验的材料播种于光照培养箱，活体植株接种试验的材料播种于隔离温室。 　　1.2方法 　　1.2.1病原茵和分生孢子悬浮液制备待感病品种长到3片真叶时，从鄯善温室采集白粉病发病合适的甜瓜叶片，放入冰盒，带回实验室处理。取下感病品种的叶片，留有0.5 cm长的叶柄，用剪刀斜切，自来水冲洗2次，然后用75%（φ）的乙醇浸泡10s，再用蒸馏水晃洗2次，置于7%（ω）次氯酸钠浸泡消毒10min，然后用无菌水冲洗2次。在超净工作台将叶片置于铺有灭过菌的滤纸的培养皿里，待水吸干后，将叶柄插入装有培养基的三角瓶中。参考李映霞配制培养基（5‰琼脂，50mg?Lω-1苯丙咪唑）。接种前用4℃无菌水将甜瓜叶片上的孢子配制成1×105个?mL-1的孢子悬浮液。用移液枪取20μL菌液均匀的接种于叶片正面。放入光照培养箱，在白天25℃，晚上20℃、湿度70%、12h光暗交替的条件下培养。接种7d后，观察发病情况。待发病充分后，取出病叶，将少量4℃灭过菌的蒸馏水冲洗成孢子悬浮液，在显微镜下调整分生孢子悬浮液的浓度约为1×105个?mL-1备用。 　　1.2.2不同寄主的离体叶片鉴定取13份国际通用的白粉病生理小种鉴别寄主展开的幼叶（第3-第4片叶），在