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甜瓜组织培养及遗传转化的研究进展 　　摘 要：概述了甜瓜组织培养过程中外植体类型、培养基组成、添加物等主要因素对植株再生的影响，以及甜瓜体细胞胚状体发生途径、单倍体、原生质体培养的研究现状和根癌农杆菌介导甜瓜遗传转化的研究进展。 　　关键词：甜瓜；组织培养；遗传转化 　　 　　1、组织培养技术研究 　　 　　甜瓜(CucumiS，melo L)是葫芦科甜瓜属植物中一种重要的瓜类作物，在我国瓜类作物栽培中占有较大种植面积。随着基因工程技术在农作物育种中的研究与应用，甜瓜组织培养技术的开展为分子辅助育种奠定了良好的基础。 　　 　　1.1 外植体基因型 　　选择不同甜瓜品种进行组织培养研究，外植体基因型差异对再生率影响明显，繁殖系数差异较大。对古拉巴、蜜翠等4个引进杂交种和七宝甜瓜、小麦瓜等4个农家品种进行的子叶培养结果表明：杂交种的不定芽诱导率高于本地品种。厚皮甜瓜状元、伊丽莎白和薄皮甜瓜新玉、白玉的子叶再生能力不同，薄皮甜瓜较厚皮甜瓜容易再生。Galperin等选用30份材料研究，表明甜瓜器官的再生能力存在着基因型的差异，有2个不完全显性位点决定着器官发生能力。厚皮甜瓜绿宝石和薄皮甜瓜甘甜1号子叶诱导不定芽和愈伤组织分化上存在较大差异。黄河蜜、绿宝石、黄醉仙等6个厚皮甜瓜品种子叶分化频率差异显著，绿宝石分化率高达100％，而白兰瓜只有6.67％，皇后再生性能各方面都弱于F7－3品种。国内许多研究结果也表明：薄皮甜瓜较厚皮甜瓜再生能力强，杂交品种再生能力较自交系强。 　　 　　1.2 外植体部位 　　甜瓜组织培养研究中，不同基因型品种的幼嫩于叶都可得到较高频率的再生不定芽，而真叶、胚轴、茎尖等部位再生频率很低，甚至不能再生。邓向东等研究了S 24和网纹香品种不定芽的诱导率为：子叶柄子叶茎尖真叶。而胚轴和根不能诱导出不定芽。状元顶芽和侧芽经初代培养、增殖培养，可得到300％的试管苗。朱丽亚甜瓜的种子、茎段及弥河银瓜的茎段可在不同培养基中分化形成小植株。甜瓜DG-1顶芽和带侧芽的茎段在适宜培养基中不定芽的增殖系数为1.5～3.2。 　　 　　1.3　外植体生理状态 　　无菌苗子叶的苗龄是其能否分化诱导成功的决定因素之一，对不同甜瓜品种的子叶进行分化诱导时，选择的苗龄不完全一致。苗龄5～10d的哈密瓜品种网纹香子叶柄愈伤组织诱导率为100％，而不定芽则是5～8d苗龄的诱导率较高，为38.1％和30.4％，苗龄10d不定芽诱导率为0。河套蜜瓜苗龄5d的无菌苗的子叶经60－70d的诱导分化培养，再生植株诱导率可达55％。伊丽莎白种子在25℃暗培养3d后切取子叶进行培养。芽的诱导率高达90％。将杂种甜瓜西薄洛托10d左右苗龄的无菌苗接种在适宜培养基中，15d后调查不定芽的繁殖系数为1.4～3.8。将日本厚皮甜瓜春丰1号苗龄7－10d的无菌苗单节切段培养，试管苗的繁殖系数为10～13d。马国斌等研究了红心脆、皇后、黄旦子、醉仙4个品种2～10d苗龄的子叶再生能力，各品种均以2d苗龄的子叶不定芽分化率最高。取蜜翠F1代种子5～6d的无菌苗子叶顶芽接种诱导，在适宜培养基上的繁殖系数达3.9～5.1。美丽娜网纹甜瓜种子在暗、光交替条件下培养25d获得无菌苗，子叶诱导不定芽的增殖系数为5.4。黄旦子5d苗龄的幼苗子叶不定芽平均诱导分化率为44.8％。 　　 　　 　　1.4　培养基成分和生长调节剂的种类及比例 　　基本培养基、生长调节剂种类及其配比是影响植物细胞脱分化和再分化的关键因素之一，特别是细胞分裂素与生长素的比例搭配，直接影响细胞分化方向及成败。由于甜瓜的离体分化存在基因型依赖性及外植体差异，不同品种、不同类型、同一品种不同部位、同一品种不同研究者获得的分化率和适宜培养基不尽相同。 　　甜瓜组织培养中常用的基本培养基为MS培养基，添加的激索是不同比例的6-BA和NAA，部分研究应用了Miller、B5、Ls等培养基及IAA、IBA、ZT、KT、2，4－D等激素。网纹香和S－24 2个品种应用了6－BA、ZT、KT、2ip、2，4-D 5种激素进行诱导。其中6－BA诱导效果最好，其最适质量浓度为0.5mg／L，低于0.1mg／L和高于1.0 mg／L时均不能产生不定芽。将河套蜜瓜子叶在MS+6－BA0.1mg／L＋NAA 1.0mg／L的培养基中预培养3d后转入MS＋ZT 6.0mg／L芽诱导培养基中，在MS＋6－BA 0.5mg／L培养基中生根，再生植株诱导率可达55％㈣。伊丽莎白子叶诱导培养基为BM3＋IAA 15mg／L＋KT 6.0mg／L＋CuSO4?5H2O 1.0mg／L,而于喜艳等将伊丽莎白子叶接种在MS＋6－BA 2.0 mg／L＋IAA 0.2mg／L培养基中分化率最高。古拉巴等杂交