索拉非尼对胃癌细胞MGC80―3抑制的作用实验的研究.docVIP

索拉非尼对胃癌细胞MGC80―3抑制的作用实验的研究 　　[摘要] 目的 探讨索拉非尼对体外培养人胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的作用以及作用机制。 方法 采用二苯基四氮唑溴盐比色法（MTT法）检测不同浓度索拉非尼作用人胃癌MGC80-3 细胞的抑制作用；AnnexinV/PI 双染法观察药物处理后细胞凋亡率变化。 结果 索拉非尼对人胃癌MGC80-3细胞增殖具有明显抑制作用，且呈剂量和时间依赖性，与对照组比较差异有统计学意义（P0.05）。 结论 索拉非尼能够诱导细胞凋亡，并随浓度增高凋亡率增加。 　　[关键词] 胃癌细胞；索拉非尼；凋亡；增殖 　　[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）21-0008-03 　　[Abstract] Objective To explore the inhibitory effective and mechanism on the proliferation and apoptosis of sorafenib in vitro gastric cancer MGC80-3 cells. Methods The inhibitory effective of sorafenib at different concentrations for gastric cancer cell MGC80-3 were analyzed by MTT assay. Apoptosis rate was observed by AnnexinV/PI staining. Results The proliferation inhibition of sorafenib on gastric cancer MGC80-3 cell was time-dose dependent manner， the difference was statistically significant （P0.05）. Conclusion The apoptosis of gastric cancer MGC80-3 cells is different and the apoptotic rate is increased with the increase of sorafenib concentration. 　　[Key words] Gastric cancer cell； Sorafenib； Apoptosis； Proliferation 　　胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居所有癌症的第二位[1]。胃癌的早期诊断难，大多数胃癌诊断时已处于进展期，除了手术治疗以及放疗或者保守化疗外，尚无有效的治疗方法。目前，药物治疗作为主要手段用于治疗晚期胃癌。随着胃癌分子生物学技术的发展，针对肿瘤细胞生长、凋亡、细胞周期、浸润以及血管生成等分子靶点提出的靶向治疗成为胃癌综合治疗的重点和热点。研究显示索拉非尼（sorafenib）是小分子多靶点、多激酶抗肿瘤药，能同时抑制存在于细胞内和细胞表面的激酶，包括RAF激酶、血管内皮生长因子-2（VEGFR-2）、血管内皮生长因子-3（VEGFR-3），具有双重抗肿瘤效应[2]。本研究通过观察索拉非尼在体外对胃癌细胞株生物学活性的作用，了解其可能的作用机制，为进一步的临床研究和应用提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要材料 　　人胃癌MGC80-3细胞株购于武汉博士德生物工程有限公司，AnnexinV-FITC和PI检测试剂盒购买于南京凯基生物科技发展有限公司，索拉非尼为德国拜耳公司生产，用10%二甲基亚砜（DMSO）溶解，于-20℃保存，实验时稀释。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 胃癌MGC80-3细胞培养 在10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中，置于37℃、5%CO2的恒温细胞培养箱中培养，取对数生长期细胞用于实验。 　　1.2.2 MTT检测索拉非尼作用于MGC80-3细胞的抑制率 将细胞分别接种于96孔平底板，每孔接种5×105个细胞。实验组分别加入不同浓度（S1：5 μmol/L、S2：10 μmol/L、S3：15 μmol/L、S4：20 μmol/L）的索拉非尼100 μL，并设不加药物的对照组。加药后分别培养24 h、48 h、72 h，药物终止作用后常规MTT法测生长抑制率，在自动酶标仪490 nm波长处测定每孔的吸光度（A）值。细胞抑制率（%）=（1-用药组平均A值）/阴性对照组平均A值×100%，实验重复3次。 　　1.2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡率 调整细胞密度为1×105/mL接种于6孔板，每孔2 mL。加入含不同浓度（5 μmol/L、10