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红花注射液化学成分及其活性的研究 　　[收稿日期] 2014-04-04 　　[基金项目] 中国食品药品检定研究院2012年中青年发展研究基金项目（2012A7） 　　[通信作者] *林瑞超， Tel：（010Fax：（010 E-mail：linrch307@ 　　[作者简介] 赵剑锋， 硕士研究生， Tel：（010Fax： （010 E-mail： zhaojianfengbest@126.com 　　[摘要] 采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究，从中分离鉴定16个化合物，经波谱学等方法鉴定为野黄芩苷（1），山柰酚-3-O-β-芸香糖苷（2），羟基红花黄色素A（3），芦丁（4），香豆酸（5），腺苷（6），紫丁香苷（7），反式-1-（4′-羟基苯基）-丁-1-烯-3-酮（8），（8Z）-癸烯-4， 6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷（9），对羟基苯甲醛（10），（2E，8E）-十四烯-4， 6-二炔-1， 12， 14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷（11），山柰酚-3-O-β-槐糖苷（12），尿苷（13），二氢红花菜豆酸（14），肉桂酸（15） 和山柰酚（16）；其中，化合物1，2，7，9，11和12为首次从红花注射液中分离得到。家兔体外抗血小板聚集活性测试结果表明，除化合物5外，其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性，以化合物2，3，9，12活性最强。 　　[关键词] 红花注射液；化学成分；抗血小板聚集活性 　　红花注射液由红花Carthamus tinctorius L.经水煮醇沉工艺加工而成，具有活血化瘀之功效，用于治疗闭塞性脑血管疾病，冠心病和脉管炎，临床疗效显著。但现有研究资料表明，除基本的药理、毒理及临床研究外，红花注射液活性成分的研究主要集中于羟基红花黄色素A[1]。为进一步阐明红花注射液的药效物质基础，在前期筛选建立功效相关生物活性测定方法的基础上[2-3]，本文采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究，从中分离鉴定了16个化合物，经波谱学等方法鉴定其结构为：野黄芩苷（1），山柰酚-3-O-β-芸香糖苷（2），羟基红花黄色素A（3），芦丁（4），香豆酸（5），腺苷（6），紫丁香苷（7），反式-1-（4′-羟基苯基）-丁-1-烯-3-酮（8），（8Z）-癸烯-4， 6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷（9），对羟基苯甲醛（10），（2E，8E）-十四烯-4， 6-二炔-1， 12， 14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷（11），山柰酚-3-O-β-槐糖苷（12），尿苷（13），二氢红花菜豆酸（14），肉桂酸（15） 和山柰酚（16）；其中，化合物1，2，7，9，11和12为首次从红花注射液中分离得到；进一步考察了制剂及上述分离化合物的体外抗血小板聚集活性，除化合物5外，其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性；首次报道除公认的羟基红花黄色素A（3） 外，黄酮苷2，12和多炔苷9具有较强地抗血小板聚集活性。 　　1 材料 　　INOVA-400，INOVA-500和VNS-600型核磁共振仪；Agilent 6320 Ion Trap液质联用色谱仪；Waters e2695液相色谱仪；Waters AutoPurification 系统；制备型反相色谱柱XBridge C18（19 mm × 150 mm， 10 μm）；分析型反相色谱Prevail C18柱（4.6 mm × 250 mm， 5 μm）；薄层色谱硅胶GF254及柱色谱用硅胶（100～200目），青岛海洋化工厂；聚酰胺（30～60目），江苏临江化学化学试剂厂；反相硅胶ODS（50 μm），日本YMC公司；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，Amersham Pharmacia Biotech AB生产；色谱纯溶剂，Thermo Fisher公司；分析纯试剂，北京化工厂；水为超纯水，Millipore制备。 　　红花注射液，盐酸川芎嗪注射液（北京市永康药业有限公司，批，氯化钠注射液（石家庄四药有限公司，批号081221161），ADP（Helena Laboratories Beaumont，批号2-10-55189），枸橼酸钠（柠檬酸三钠，国药集团化学试剂有限公司，批号。大耳白兔，雄性，体重2.2 kg，清洁级，动物合格证号SCXK （京）2011-0010，由中国食品药品检定研究院实验动物资源中心提供。 　　2 方法 　　2.1 提取分离 取红花注射液样品20 L，经聚酰胺柱色谱纯化，用乙醇-水梯度洗脱（0∶100～95∶5），得到4个组分（Fr.1～Fr.4）。组分