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红菇多糖体外抗氧化的作用的研究 　　【摘 要】为了进一步开发利用红菇资源，笔者研究了红菇多糖对DPPH自由基、羟基自由基以及超氧阴离子自由基的清除能力。结果表明：红菇多糖对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基都具有较强清除作用，并呈一定的量效关系，表明红菇多糖具有良好的抗氧化作用。 　　【关键词】红菇多糖 抗氧化 DPPH自由基 羟基自因基 超氧阴离子自由基 　　红菇（Russula lutacea F r.） 属真菌植物门，担子菌亚门、担子纲、红菇目、红菇科，乳菇属。目前已发现的红菇属真菌种类至少在750种以上，其中我国有150多种，红菇子实体提取物具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗菌、抗疲劳、降血脂、降血糖等多种药理活性，是不可多得的纯天然的保健食用菌，红菇不但具有良好的药用效果，而且不会对机体产生毒副作用。 　　多糖类化合物对自由基具有良好清除作用，而现代医学研究表明机体的衰老、细胞癌变以及免疫性疾病等等都和机体中自由基代谢有直接关系，因此，对清除自由基的研究已经受到越来越多研究者的关注。本实验利用超声波辅助提取红菇多糖，研究其清除自由基的抗氧化活性，为进一步开发红菇资源打下良好基础。 　　1 材料与仪器 　　1.1实验材料 　　野生红菇：购自广西容县。红菇多糖：超声辅助水提经savage法脱蛋白所得脱蛋白红菇多糖。1，1 -二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、氯仿、水杨酸、乙醇、正丁醇、H2O2.抗坏血酸（ VC）、甲醇等均为分析纯。双蒸水为实验室自制。 　　1.2主要仪器 　　摇摆式高速万能粉碎机（DFY-250）;电子天平BS323S（北京赛多利斯仪器系统有限公司）;HH-4数显恒温水浴锅（国华）;TU一1900双光束紫外可见分光光度计 （北京普析）;超声波清洗仪KQ5200M（东莞市科桥超声波设备有限公司）; LGJ-冷冻干燥机;离心机（上海安亭） 　　2 实验方法 　　2.1红菇子实体的预处理 　　先将红菇子实体烘干粉碎后，过60目筛，得红菇干粉，称取红菇干粉200g，加入1000ml圆底烧瓶中，按液料比3∶1（ml/g），加入80%乙醇80℃热水恒温回流2次，每次60min，再抽滤除去脂肪，单糖、低聚糖等杂质，放到烘箱中低温烘干备用。 　　2.2 红菇多糖的提取 　　准确称取50g预处理红菇干粉，按一定料水比置于1000 mL锥形瓶中，超声波清洗器中超声提取，将提取液过滤，滤液浓缩1/3，经过Sevage法脱蛋白法反复处理3次直至无明显沉淀，然后加入3倍体积的95%乙醇，置4℃冰箱过夜，4000r/min 离心10 min，收集沉淀，放入冷冻干燥机冷冻干燥，得红菇多糖粉末。取提取液适当稀释后，硫酸苯酚法测定多糖含量。多糖得率（%）以单位质量子实体干粉提取的多糖质量表示。 　　2.3红菇多糖样品液制备 　　分别准确地将红菇多糖配成浓度为1mg/ml的溶液，用蒸馏水将该溶液稀释成浓度为：50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml，以相同浓度的VC为阳性对照。 　　2.4红菇多糖的体外抗氧化能力测定 　　2.4.1清除DPPH自由基能力测定 　　配置2mol/LDPPH甲醇溶液避光保存，取 0.4 ml待测样液加入2ml2mol/L DPPH甲醇溶液具塞试管中，充分摇匀，25℃恒温避光放置30min， 在517nm处测定吸光值Ai，每个浓度样品平行做3次，以相同浓度VC作为阳性对照。 　　清除DPPH自由基活性按下列公式计算： 　　DPPH自由基清除率/% =[1-（Ai-Aj）/A0]×100 （2-1） 　　式中， Ai： 2mlDPPH溶液加 0.4 ml红菇多糖溶液的吸光值; Aj： 2ml甲醇溶液加 0.4 mL红菇多糖溶液加的吸光值; A0： 2mlDPPH溶液加 0.4 mL蒸馏水的吸光值。 　　2.4.2清除羟基自由基能力测定 　　反应体系中加入9mol/LFeSO4 lml，9mol/L水杨酸一乙醇lml，红菇多糖样品溶液1ml，最后加入1ml6mol/L H2O2启动反应，37℃反应0.5h，以蒸馏水为参比，在510nm处测定各浓度的吸光值。以1ml 9mol/LFeSO4，1ml 9mol/L水杨酸――乙醇，不同浓度的红菇多糖溶液1ml和1ml蒸馏水作为多糖的本底吸收值，以相同浓度VC溶液作为阳性对照。 　　清除率计算公式： 　　清除率/%= ×100 （2-2） 　　式中， A0： 空白对照液的吸光度;AX： 加入红菇多糖溶液后的吸