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肉鸭生物床安全性的研究 　　摘要：肉鸭生物床养殖模式是最近几年兴起的一种养殖方式，生物床垫料是否存在病原微生物和重金属超标，一直是人们关注的问题。对使用3个月、6个月、1年、2年、3年的生物床垫料中的病原微生物及重金属含量进行了检测。结果表明，3、6个月的生物床中并无影响禽类的病原微生物； 1、2、3年的生物床垫料中的沙门氏菌、大肠杆菌含量较低；大多数样品的重金属含量均低于进口有机肥一级标准，仅3个月生物床垫料中的Cd、2年生物床垫料中的Zn含量高于进口有机肥一级标准但低于二级标准。研究结果表明利用生物床垫料养殖肉鸭是安全可靠的。 　　关键词：生物床；肉鸭；病原微生物；重金属 　　中图分类号：S834 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）05-1120-03 　　近20年来，肉鸭养殖方式逐渐由地面平养向网上平养、生物床养殖等方式转变。地面平养和网上平养均存在环境污染较大的问题，随着人们对环境污染的重视，生物床养殖模式逐渐兴起。肉鸭生物床养殖是指按一定配方将枯草芽孢杆菌菌种、锯末、稻壳、秸秆等混合发酵后铺于舍内。肉鸭排泄物可被有机垫料中的微生物迅速降解，进而改善禽舍内部环境，保持清洁卫生，以减少禽的发病率和兽药的使用[1，2]。由于肉鸭直接在生物床垫料上生长，生物床垫料是否存在病原微生物及重金属超标一直是人们关注的问题，因此有必要对生物床垫料的安全性进行研究。 　　本试验对使用3个月、6个月、1年、2年、3年的生物床垫料中的病原微生物及重金属含量进行了检测分析，旨在为生物床垫料的合理使用提供参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　采集使用3个月、6个月、1年、2年、3年的肉鸭生物床垫料。采样方式为多处采样后再混匀。 　　1.2 检测单位及检测指标 　　检测单位为农业部微生物产品质量监督检验测试中心（武汉）。检测指标为所取样品中总菌数、重金属含量以及病原微生物的含量。其中重金属的检测指标为各个样品中Cu、Zn、Cr、Pb、Cd的含量，病原微生物的检测指标为常见的禽类肠道致病菌大肠杆菌（Escherichia coli）和沙门氏菌（Salmonella）。 　　1.3 检测方法 　　1.3.1 总菌数的检测 总菌数的检测参照GB 4789.2-2010食品微生物学检验 菌落总数测定，对各样品进行适当的梯度稀释，然后取稀释后的菌液均匀涂布于营养琼脂培养基平皿上，37 ℃培养36 h后计数。 　　1.3.2 病原微生物的检测 为了尽可能多地了解垫料中病原菌的种类，利用16S rDNA测序鉴定方法检测3个月、6个月样品中的病原微生物。先将样品中的菌在YPD平板上划线分离，挑取单菌落再次划线分离以保证菌的纯度，再挑取单菌落于液体YPD培养基中摇瓶培养一定时间（各种不同的菌所需培养时间不同），离心收集菌体，提取总DNA，利用16S rDNA引物对其进行PCR扩增，利用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，然后对扩增产物测序，在NCBI相应数据库中进行序列比对，得到该菌所属菌属。 　　1年、2年、3年样品中的病原微生物的检测采用选择性培养基鉴定计数法，选取禽类肠道病原菌中最常见、最具有代表性的大肠杆菌和沙门氏菌为检测指标，参照GB 4789.3-2010食品微生物学检验 大肠菌群计数、GB 4789.4-2010食品微生物学检验 沙门氏菌检验，利用各自的选择性培养基对梯度稀释后的样品涂平板，37 ℃培养18～24 h后计数。 　　1.3.3 重金属含量监测 重金属Pb、Cd、Cu、Zn、Cr的检测分别按照国家标准（GB/T 5009.12-2010 食品中铅的测定、GB/T 5009.15-2003 食品中镉的测定、GB/T 5009.13-2003食品中铜的测定、GB/T 5009.14-2003食品中锌的测定、HJ491-2009土壤 总铬的测定 火焰原子吸收分光光度法）进行检测，结果均以平均值±标准差表示。 　　2 结果与分析 　　2.1 3个月、6个月生物床垫料中微生物种类检测结果 　　通过对3个月、6个月生物床垫料的优势微生物菌群检测发现，在3个月垫料中存在的微生物主要有：松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）、棒杆菌属（Corynebacterium）、变形杆菌属（Proteus）、纤维微细菌（Cellulosimicrobium cellulans）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、放线菌属（Actinomyces）、细杆菌属（Microbacterium）、芽孢杆菌属（Bacillus）、苍白杆菌属（Ochrobactrum）、原小单孢菌属（Promicromonospora）。6个月垫料中的微生物主要有：不动杆菌属（Acine