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超声波辅助提取灵芝三萜工艺的研究 　　摘要：采用超声波辅助提取灵芝三萜，基于单因素试验结果，以灵芝三萜得率为评价指标，采用正交试验方法优化灵芝三萜提取工艺条件。结果表明，在乙醇浓度85%、超声时间15 min、超声温度80 ℃、料液比1∶25的条件下，灵芝三萜得率最高、为2.19%。 　　关键词：灵芝；三萜；超声波；提取；优化；正交试验 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2017）06-0041-03 　　灵芝又称灵芝草、仙草、瑞草，在药物领域中已有2000多a的使用历史，是我国最著名的高等药用真菌。灵芝具有抗肿瘤、调节免疫、镇静镇痛、抗肝损伤、改善记忆、降脂、抗辐射、降血糖、抗血栓、抗疲劳等药理作用。灵芝不仅具有广泛的药用价值，因其无毒、无害、无副作用，在食品领域也早有应用，是一种极佳的药食两用物质。灵芝中的多糖、三萜、生物碱、核苷等有效成分是灵芝发挥治疗作用的物质基础。但灵芝三萜的含量相对较低，对照品也很难获得，且在提取过程中不稳定。因此，需要寻求一种切实可行的方法来提高灵芝三萜得率。本研究采用超声波法对灵芝三萜提取工艺条件进行优化，以期为灵芝三萜的工业化生产及其产品的深度开发提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　灵芝：吉林敖东世航产业股份有限公司；齐墩果酸标准品：沈阳市国药试剂有限公司；无水乙醇、冰乙酸、香草醛、高氯酸、乙酸乙酯均为分析纯。 　　1.2 仪器设备 　　WFZUV-2000型紫外分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司；AXTD5A型台式低速离心机：盐城市安信实验仪器有限公司；DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司；TB-114型电子天平：梅特勒―托利多仪器（上海）有限公司；KQ5200DB型数控超声波清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；电热恒温水浴锅：上海精宏实验设备有限公司。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 灵芝三萜提取工艺流程 取适量灵芝烘干→粉碎→准确称取适量灵芝粉末→加入乙醇→超声辅助浸提→真空抽滤→滤液浓缩→干燥，即得灵芝三萜。 　　1.3.2 标准曲线绘制 准确称取5.0 μg齐墩果酸标准品于25 mL容量瓶中，加入无水乙醇，定容，即得母液。精确吸取母液0，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL分别置于试管中，以试剂为空白参比，沸水浴挥发去除溶剂，挥发完全后加入0.4 mL 5%香草醛―冰乙酸和1.6 mL高氯酸，摇匀后将试管置于70 °C水浴锅中加热处理15 min，取出后用冰水快速冷却至室温，再加入8 mL乙酸乙酯，混匀，在560 nm处测定吸光度值。以齐墩果酸浓度为横坐标、吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，得到：y=8.323 5 x-0.047 8，R2=0.999 7，线性关系良好。 　　1.3.3 灵芝三萜测定 精密称取灵芝三萜粉末1 g，加入乙醇，采用超声波提取，抽滤，准确吸取无水乙醇和三萜滤液各1 mL于试管中，按1.3.2中方法测定560 nm处的吸光度，根据标准曲线计算待测液中的三萜含量Y，利用下式计算三萜得率。 　　三萜得率（%）={（Y/1 000）/[（m/50） ×V]} ×100 　　式中：m为样品质量，mg；V为吸取滤液的体积，mL；Y为灵芝三萜含量，μg。 　　1.3.4 单因素试验 在其他条件相同的情况下，分别考察乙醇浓度（55%，65%，75%，85%，95%），料液比（1∶15，1∶20，1∶25，1∶30，1∶45），超声温度（40，50，60，70，80 °C），超声时间（5，15，25，35，45 min），超声功率（50，140，160，180，200 W）对灵芝三萜得率的影响。 　　1.3.5 正交试验 在单因素试验结果的基础上，以灵芝三萜得率为指标，进行L9（34）正交试验。 　　2 结果与分析 　　2.1 单因素试验结果 　　2.1.1 乙醇浓度对灵芝三萜得率的影响 不同乙醇浓度下灵芝三萜得率如图1所示。 　　由图1可以看出：灵芝三萜得率随乙醇浓度升高而提高。当乙醇浓度为55%时，灵芝三萜得率仅为0.29%；当乙醇浓度为95%时，灵芝三萜得率最高，为1.69%；而乙醇浓度在85%～95%之间时，灵芝三萜得率非常相近。 　　2.1.2 料液比对灵芝三萜得率的影响 不同料液比下灵芝三萜得率如图2所示。 　　由图2可以看出：在料液比为1∶30时，灵芝三萜得率最高，为1.71%；当料液比小于1∶30时，溶剂量过少，样液过于粘稠，不利于超声波空化作用的产生，也不利于超声波在溶剂中的传播扩散，所以提取率相对较低；随着料液比的增大，灵芝三萜得率提高，但是当料液比超过1∶30时，可能因溶剂量过大反而影响了超声波对灵