超声波辅助提取草珊瑚中反丁烯二酸工艺的研究.docVIP

超声波辅助提取草珊瑚中反丁烯二酸工艺的研究 　　【摘 要】 针对草珊瑚（三明）中反丁烯二酸的提取工艺的研究，采用超声波法进行优选，用液相色谱法（测量条件：Agilent 1200C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，比例为（2：98），流速为1.0mL/min，柱温30℃，检测波长208nm，出峰时间为1.471min）测定不同条件下样品的吸收峰，以吸收峰大小为指标定性分析从而确立单因素设计正交实验，通过正交实验研究5因素（溶剂浓度、pH、超声波功率、超声波温度、料液比）对草珊瑚中反丁烯二酸的提取效果的影响。通过正交实验最终确立了最优提取工艺：溶剂浓度70%；pH=4；超声波功率50w；超声温度50℃；料液比1：35，提取时间为40min。通过该实验确立最优工艺提取效果好，简便易行。 　　【关键词】 草珊瑚 反丁烯二酸 超声波 液相色谱法 吸收峰 工艺研究 　　草珊瑚是金粟兰科植物，它的俗名有肿节风、九节茶、接骨金粟兰等。其为金粟兰科多年生常绿亚灌木，分布于江西、浙江、福建、台湾、云南等长江以南各省区内。而本实验所研究的是三明的吉口草珊瑚。它的药用价值很高，整株可供药用。草珊瑚味苦、辛、性平，草珊瑚是一种传统中药材，它含挥发油、反丁烯二酸、黄酮甙、氰甙、氨基酸、香豆素、内酯等，具清热凉血，活血消斑，祛风通络抗菌消炎等功效，主要用于治疗跌打损伤、胃溃疡、胃癌、白血病、流行性感冒、恶性肿瘤等疾病[1]。而对于反丁烯二酸来说它具有抗菌消炎的作用，可用于治疗严重银屑病。草珊瑚有很高的药用价值，为了使它的有效成分得到更好的利用，很有必要对草珊瑚中的反丁烯二酸的提取方法进行研究。 　　因此本实验针对这一事实设计了以下实验方案。本实验方案是选用三明三元吉口的草珊瑚以超声波法辅助提取[2]，用液相色谱法测定相应的吸收峰，通过比较吸收峰大小定性分析[3-5]，从而确立最优提取条件，为合理而有效地开发野生草珊瑚提供可靠依据。 　　1 实验部分 　　1.1 原料、试剂和仪器 　　（1）实验原料、试剂；草珊瑚叶（三明吉口）；超纯水（娃哈哈纯净水）；分析纯：纯乙醇、氢氧化钠固体、盐酸；色谱纯：乙腈、甲醇、磷酸、异丙醇、反丁烯二酸（上海）。（2）实验仪器及材料；FA1604N型电子天平，上海精密科学仪器有限公司生产；SHB-3循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司生产；KQ3200DB型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产；Agilent Technologies 1200 series液相色谱仪；RE-52B旋转蒸发仪，上海博经经贸公司；数显恒温水浴锅；Uvmini-722型紫外-可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；用0.45μm微孔滤膜（有机相、水相）、微孔过滤器、pH试纸等。 　　1.2 分析方法 　　本实验提取的是反丁烯二酸，标准品反丁烯二酸配制标准液于722-紫外分光光度计确定最大吸收波长为208nm，采用液相色谱法利用标准品反丁烯二酸的比较，确定样品吸收峰，通过分析各样品的吸收峰的大小，定性分析，确定最优提取条件。液相色谱法的测量条件：Agilent 1200C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，流速为1.0mL/min，柱温30℃，检测波长208nm。 　　1.3 实验步骤 　　（1）备料；把草珊瑚叶子冼净、烘干，然后用粉碎机将其粉碎，过40目分样筛，备用。（2）配制溶液；分别配制2%氢氧化钠溶液、6%盐酸溶液、1%磷酸溶液、不同浓度（10%-90%）的乙醇溶液。（3）提取的工艺流程；草珊瑚叶子（三明）洗净→烘干→粉碎→分别称取3g草珊瑚→根据料液比的量加乙醇（不同浓度）→调节pH→冷浸1h→超声波提取（不同功率、温度、时间）→减压抽滤并取滤液→旋转蒸发浓缩→用相应浓度乙醇溶解定容至100mL→取1mL于25mL容量瓶中定容→用0.45μm微孔滤膜过滤→用高效液相色谱法测定吸收峰→分析计算→确定最优工艺条件。 　　1.4 超声波辅助提取草珊瑚中反丁烯二酸的影响因素 　　（1）超声波法提取单因素实验；准确称取3.00g草珊瑚粉末，分别对不同乙醇浓度、pH、超声波功率、超声波温度、料液比、时间进行单因素实验。各因素选取的点如下： 　　溶剂/%：（不同浓度的乙醇）10、20、30、40、50、60、70、80、90； 　　pH：1、2、3、4、5、6、7、8； 　　超声波功率/w：10、20、30、40、50、60、70、80 　　超声波温度/℃：20、30、40、50、60、70； 　　料液比g/mL：1：05、1：10、1：15、1：20、1：25、1：30、1：35 　　时间/min：10、20、30