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乳腺癌血清蛋白质谱在手术前后变化剖析 　　摘要：目的： 应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术分析乳腺癌病人手术前后血清蛋白质谱的变化。方法： 应用SELDI技术（CM10芯片），检测65例行改良根治术的乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月血清蛋白质谱并分析其差异。结果： 共发现11个蛋白质峰与正常女性存在差异， 5个术前增高的蛋白质峰中有4个在术后1月降至对照水平，6个术前降低的蛋白质峰在术后7天及术后1月均低于健康对照峰值水平。结论： 乳腺癌相关蛋白峰在术后的动态变化可能成为评价手术疗效预测的参考指标，同时在乳腺癌术后复发转移监测等方面有一定的意义。 　　关键词：表面加强激光解析电离化飞行时间质谱 乳腺癌 　　乳腺癌是一种全身性疾病，主要治疗手段有化疗、手术、放疗及内分泌治疗等，其中手术是乳腺癌综合治疗的重要组成部分。部分乳腺癌病人经过手术及后续的综合治疗能够长期存活，但也有病人术后很快出现复发转移，而一旦复发转移，乳腺癌就成为不可治愈的疾病。因此，早期发现复发转移就成为治疗的关键，目前临床上主要依靠定期随访影像学（包括彩超、钼靶、CT、ECT、PET/CT等） 以及血清学指标（如CEA和CA153），但影像学存在难以发现小病灶（1cm以下）、费用较高、存在辐射等缺陷，血清学标志物也存在敏感性、特异性较差的缺点[1]。由于恶性肿瘤的发生是一个逐步的过程，可能发生一系列蛋白组学的改变，因此，通过近年出现的表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）蛋白组学技术，能够快速、敏感地在血清中同时筛选出多个的未知生物标记物，其检测肿瘤的敏感性和特异性均高于传统肿瘤标志物[2]，因此，我们应用SELDI技术分析乳腺癌病人手术前后的血清蛋白质谱变化，以期发现其变化规律。 　　1.资料与方法 　　1.1临床资料：收集我院2013年1月-2013年10月经病理确诊的65例女性乳腺癌病人手术前后的血清标本，中位年龄47岁，其中Ⅰ期18例， Ⅱ期19例，Ⅲ期28例。 　　1.2. 主要仪器及试剂：ProteinChip Biology System质谱仪（PBSⅡ-C型）、CM10蛋白质芯片、BioMarker Wizard分析软件，三氟乙酸（ TFA ） 、乙腈（ACN ） 、Tris-HCl 、能量吸收分子SPA等试剂（Sigma公司）。 　　1.3. 样品的处理：采集患者清晨空腹静脉血5ml，4℃静置1小时后再分离血清，分装后- 80℃保存。分析前将- 80℃保存的血清标本冰浴中解冻，10000rpm、4℃离心5min，取10μl与20μlU9缓冲液在EP管中充分混匀，冰浴振荡30min使蛋白质充分变性，将360μl CM10-buffer加入30μl上述变性后的样品，尽快混匀。 　　1.4. 芯片监测、数据采集和参数设置：经芯片处理、上样和洗脱步骤后，采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读仪读取芯片，收集数据采用Ciphergen ProteinChip软件，分析数据采用BioMarker Wizard软件。控制筛选出的蛋白质峰在10%以上样本中同时存在，且同一蛋白质峰在不同样本中的偏差0. 3%。分别比较乳腺癌患者术前、术后3天及术后1月的血清蛋白质谱，寻找组间表达有差异（ P 0. 01）的蛋白质峰。 　　1.5 统计分析：所得数据以均数±标准差表示，对不同组中相同质荷比的蛋白质含量数据进行方差分析，P0.01具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月血清蛋白质谱比较.我们随访收集了65例行改良根治术的乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月的外周血血清，并分别检测其差异蛋白质谱。共筛选出11个差异蛋白质峰，其中术前高于正常女性的差异蛋白质峰有5个（2947、3272、7783、7985、15952 Da），术前低于正常女性的差异蛋白质峰有6个（4179、5642、6442、6639、8705、13771 Da），其变化结果见表1及图1、2。 　　表1 乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月血清蛋白质谱差异蛋白质峰 　　△P0.05：与健康女性比较增高；*P0.05：与健康女性比较降低， 　　图1. 术前增高的5个蛋白质峰（Da均值）在术后的变化及与健康对照的比较 　　图2. 术前降低的6个蛋白质峰（Da均值）在术后的变化及与健康对照的比较 　　2.2乳腺癌病人手术前后血清蛋白质谱差异蛋白质峰变化趋势分析 　　进一步分析表明，术前增高的5个蛋白质峰中有4个蛋白质峰（2947、3272、7985、15952 Da）在术后1个月的峰值有向正常峰值变化的趋势，而其中的7985、15952 Da两个峰值虽然在术后7天较术前