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黄柏苷化感的作用的研究 　　摘要 对黄檗落叶中新化感物质黄柏苷在黄檗及近缘种黄皮树种子萌发及生长过程中的化感作用进行研究，以期解读黄檗野生种群中幼苗稀少的成因。从黄檗落叶中提取分离黄柏苷，用不同浓度的黄柏苷溶液对后熟阶段及发芽阶段的黄檗及黄皮树种子进行处理，检测种子发芽率、发芽指数、幼苗株高及根的长度，通过各单项指标及综合性指标（种子活力指数）评价黄柏苷的化感效应。结果表明：黄柏苷溶液在0.30 g·L-1水平对黄檗种子的后熟、0.15 g·L-1水平对黄檗种子的萌发产生显著抑制作用；在0.15 g·L-1水平对黄皮树种子的后熟及萌发均产生显著抑制作用，且抑制强度随浓度的增高而增强。黄柏苷的存在可降低黄檗及黄皮树种子的发芽率，延长萌发时间，降低幼苗对环境的适应能力，黄柏苷可能是黄檗野生种群中幼苗稀少的成因之一。 　　关键词 黄柏苷；化感作用；黄檗；黄皮树；种子萌发 　　收稿日期 2013-02-02 　　基金项目 国家“重大新药创制”科技重大专项（2012Z 　　通信作者 *张昭， Tel：（010E-mail：zhangzhao1962@163.net 　　黄檗为传统中药关黄柏的基原植物，其野生种群存在自我更新障碍，种群中幼年植株稀少，已被列为国家二级保护物种。本课题组以往的研究表明，黄檗自身的化感作用是导致其濒危的重要原因之一。陶月红、张昭等[1]研究发现，在黄檗果皮中存在抑制种子萌发和幼苗生长的物质。张晓玲、张昭等[2-3]进一步证实，果皮低温水浸液、热水提取液和乙醇提取物中均存在抑制黄檗、白菜和小麦种子萌发和幼苗生长的化感物质。夏天睿、张昭等[4-5]研究发现，黄檗落叶水浸液对黄檗、芸香、油菜、水萝卜及小麦种子的萌发均有抑制作用，对幼苗的根长也有一定抑制作用，据此推断落叶中可能存在化感物质。戴灵超、张昭等[6-7]借鉴天然药物化学中活性筛选的研究方法和手段，对黄檗落叶进行化感活性成分的提取和分离，确定在落叶中存在对小麦种子萌发及幼苗生长具有抑制作用的化感物质。从活性组分中分离得到的已有报道的化感物质有：6-甲氧基-7-羟基香豆素；伞形花内酯；山柰酚；槲皮素；山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷；槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷[8-15]，活性组分中的主要成分黄柏苷的化感作用未见报道，经初步筛选确定是一种新的化感物质。 　　本实验就黄柏苷的化感作用进行研究，希望通过黄柏苷对黄檗及近缘种黄皮树种子萌发过程以及幼苗生长影响的研究，进一步确定黄柏苷的化感活性，并探讨其在黄檗种群自我更新障碍中的可能作用。黄檗种子具有休眠特性[16-17]，需要低温层积解除休眠，采集于北京的黄皮树种子也具有一定程度的休眠特性，本实验对休眠解除以及萌发过程2个阶段分别进行研究。 　　1 材料 　　黄檗种子于2010年10月采集于北京市萝卜地，黄皮树种子于2011年采集于中国医学科学院药用植物研究所植物园内。经中国医学科学院药用植物研究所张昭研究员鉴定为黄檗Phellodendron amurense Rupr.种子和黄皮树P. chinense Schneid.种子。 　　黄柏苷从黄檗落叶中提取分离得到，黄檗落叶于2010年及2012年秋季在药用植物研究所内黄檗树下收集。泊洛沙姆，品名F-68，南京威尔化工有限公司产品。智能型光照培养箱，宁波江南仪器厂，Gxz型。 　　2 方法 　　2.1 黄柏苷溶液的制备 　　黄柏苷难溶于水，前期实验表明，1%以下的泊洛沙姆溶液与对照水溶液相比，对种子的萌发及生长无影响[3]，本实验选用泊洛沙姆作为助溶剂，称取一定量的黄柏苷，加入泊洛沙姆和少量蒸馏水，充分研磨和搅拌，直到完全溶解于水中，蒸馏水定容得0.00，0.15，0.30，0.45，0.60，0.75 g·L-1的黄柏苷溶液，泊洛沙姆的质量分数均为1.00%。 　　2.2 黄柏苷对种子低温后熟影响 　　将黄檗和黄皮树种子分别在1%泊洛沙姆溶液和质量浓度为0.15，0.30，0.45，0.60，0.75 g·L-1的黄柏苷溶液中浸泡24 h，使其充分吸胀，之后黄檗种子放入4 ℃冰箱中低温层积40 d，黄皮树种子放入4 ℃冰箱中低温层积30 d，期间用相应溶液保持种子湿润，以1%泊洛沙姆溶液浸泡的种子为对照。在萌发试验中，以蒸馏水为培养液，将种子置于纸上发芽床上，30粒/皿，每个处理4次重复。置于光照培养箱中，每天12 ℃，无光照12 h；26 ℃，光照3 000 lx，12 h。从培养开始的第5天至第30天，每5 d记录一次种子发芽数，待萌发实验结束后，每皿随机取20株（最终形成幼苗少于20株的培养皿全部选取）进行幼苗株高、根长等幼苗指标的测定。 　　2.3 黄柏苷对种子萌发影响 　　将