miR-21对SD大鼠骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的实验-研究.pdf

miR-21 对SD 大鼠骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的实验研究 中文摘要 miR-21 对SD 大鼠骨髓间充质干细胞 治疗心肌梗死的实验研究 中文摘要 目的:通过过表达或抑制microRNA-21(miR-21) 在SD 大鼠骨髓间充质干细胞 SD-BMSCs(MSCs) 内的表达，评估其在治疗心肌梗死的效果上的变化，并研究其作用 机制。 方法:采用全骨髓差异贴壁法分离培养SD大鼠MSCs至第4代，使用脂质体转染法 转染miR21-agomir （过表达）及miR-21 antagomir （抑制）调控miR-21在MSCs 内的表 达，转染成功后收集细胞并收集条件培养基，用于后续研究。体内实验中，建立SD 大鼠心肌梗死模型后，采用心肌内注射方法，分别将MSCsmiR-21 agomir组、MSCsmiR-21 antagomir组、MSCs未转染组及PBS移植至心梗及周边区域，通过检测大鼠心梗后心功能 变化及心梗面积评估治疗效果。体外实验中，购买原代脐静脉内皮细胞(HUVEC) ，心 肌细胞系H9C2细胞，子宫颈癌细胞系Hela细胞。以Hela细胞为载体，通过双荧光素 酶报告验证miR-21 的靶点是否为Jagged1 。同时利用收集的MSCs转染组产生的培养基 和MSCs未转染组产生的培养基及含有10%FBS+双抗的DMEM/HIGH培养基 （空白对 照），用作以下两个实验，一是处理HUVEC细胞72小时后在Matrigel基质胶上培养， 于12小时观察成管样结构；二是处理H9C2细胞72h后加入CCK-8溶液孵育1个小时， 检测细胞增殖情况。 结果:体内实验中: MSCsmiR-21 antagomir组平均LVEF(%)变化值：17.14± 2.63, MSCs miR-21 agomir组LVEF(%)变化值:13.09±1.74,MSCs未转染组LVEF(%)变化值: 13.34± 2.25, 三组与对照组LVEF(%)变化值:7.09±4.23相比，心功能恢复效果更佳，差异有统计学 意义(P0.05),三组之中，MSCsmiR-21antagomir组与心功能恢复效果最佳，与其他两组相比 差异有统计学意义(P0.05) 。通过Masson染色分析心梗面积发现心梗区域纤维化组织 与正常心肌面积所占横截面外周径比值(%):MSCsmiR-21 antagomir组最小，为10.50 ±3.15， 与MSCsmiR-21 agomir 15.91+4.12、MSCs未转染组20.34±3.25 、PBS组37.09±6.23均有统计 I 中文摘要 miR-21 对SD 大鼠骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的实验研究 学差异(P0.05) 。心梗区域纤维化组织与正常心肌面积所占横截面面积比值(%) MSCsmiR-21 antagomir 组同样最小，为8.31±2.35, 与MSCsmiR-21 agomir 组19.91+4.93、MSCs 普通组25.14±2.19 、PBS组31.04±5.93均有统计学差异(P0.05) 。通过双荧光素酶报告 基因验证，我们发现miR-21 可与Jagged1 的mRNA 3’UTR 段结合，说明miR-21 对 Jagged1具有调控作用。qRT-PCR显示，转染miR-21 antagomir 的MSCs 内的Jagged1 、 NOTCH 、VEGF等基因全部上调。体外管样生成实验中，MSCsmiR-21 agomir培养基组体 外管样结构连接长度(11976.14±866.62)与MSCsmiR-21 antagomir 培养基组(12196.52±858. 00) 、MSCs未转染培养基组(12275.09±561.74)之间均无统计学差异(P0.05) ，但三组 与空白组之间均有统计学差异(P0.01) ；CCK8实验中，抑制了miR-21在MSCs 内的表 达后，其条件培养基促心肌增殖的能力得到了明显的增强。 结论:抑制了miR-21在MSCs 内的表达后，其治疗心肌梗死的能力得到了增强。 miR-21可与Jagge