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细胞—遗传学基础实验 技能训练 学 院 生命科学与生物制药学院 专 业 生物科学 年 级 2012 学生姓名 刘燕桢 学 号 1209503109 指导教师 陈珺 2014年 6 月 5 日 目 录 摘要……………………………………………………………………………………1 前言……………………………………………………………………………………1 1.土人参原生质体的制备、培养及植株再生 ……………………………………2 1.1土人参细胞悬浮培养体系的建立 …… ………………………………………2 1.2土人参原生质体的制备、培养及植株再生 …………………………………3 2.土人参愈伤组织的紫外线诱变及植株再生 ……………………………………4 3.秋水仙素诱发土人参多倍体及植株再生 ………………………………………4 4.非洲紫罗兰花药培养及植株再生 ……………………………………………5 5.土人参再生植株的遗传分析 ……………………………………………………5 5.1土人参再生植株的染色体检测………………………………………………5 5.1.1染色体标本的制备和观察 ………………………………………………6 5.1.2染色体核型分析 …………………………………………………………7 6.实验结果与分析……………………………………………………………………7 6.1. 土人参细胞悬浮培养系的建立 ……………………………………………7 6.2.?土人参原生质体原生质体在等渗和低渗环境中的观察 …………………7 6.3.?土人参愈伤组织的紫外线诱变 …………………………………………9 6.4经秋水仙素诱发土人参多倍体………………………………………………9 6.5非洲紫罗兰花药培养后得到的观察 ………………………………………10 6.6对土人参再生植株进行核型的分析 ………………………………………10 结束语 ……………………………………………………………………………11 参考文献……………………………………………………………………………12 摘 要 本实验通过细胞学与遗传学的合并实验来提高学生的实验基础技能，培养把各科知识系统地结合起来，运用到实际操作中。其方法是建立土人参悬浮细胞体系，制备培养土人参原生质体，用秋水仙素诱发土人参多倍体及植株再生和对紫罗兰进行花药培养及植株再生；结果得到了经过秋水仙素诱导的多倍体土人参和由花药培养得到的单倍体紫罗兰。通过该实验，掌握了在细胞水平上进行遗传改造的方法与技巧，也深刻体会到遗传改造的意义所在，得出可在细胞基础上进行遗传改造的方式去探索出生物遗传和变异规律的结论。 关键词：土人参；多倍体；紫罗兰；花药培养 前言 本次实验以《遗传学》和《细胞生物学》两门学科的部门部分知识交叉点为理论基础，以土人参与紫罗兰为基本材料，运用细胞培养技术和植物体的理化诱变方法在无菌条件下对其进行遗传改造。以细胞作为生命活动的基本单位为出发点，探索生物遗传与变异的规律。不仅验证了两门学科中的理论知识，学习到相关的实验技术，而且也加强了对学生综合能力的和科学思维的培养，达到学科之间交叉学习，加深认识的作用。 非洲紫罗兰花药培养及植株再生 实验材料 非紫罗兰未开放的花蕾 实验器材与试剂 A.实验器材 超净台、眼科镊2把、9cm培养皿、枪状镊、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜等。 B.试剂 a)培养基 MS培养基（见专题2-1） 分化培养基 MS + 1mg/L 6BA+ 0.1mg/L NAA） 生根培养基 1 /2MS + 0.2mg/l BA b)乙醇：95%、85%、75%、70% c)0.1%升汞溶液（或10%的次氯酸钠溶液） d)卡诺氏固定液 e)1mol/LHCL f)改良苯酚品红染色液 4）实验步骤 A.选材 未开放的紫罗兰花蕾。 B.材料消毒 剪下未开放的紫罗兰花蕾，置75%酒精中浸泡1min，取出后在无菌条件下除去花萼和花瓣并取出花药，用75%酒精浸泡花药10秒，无菌水清洗3次后， 再用0.1%的升汞溶液浸泡8min，然后用无菌水冲洗7~8次，去除残留升汞。 C.花药接种和培养 将消毒过的花药植于固体培养基上，置25℃、暗培养20d左右，花药膨大并长出愈伤组织，观察记录其形态特征。 D.继代培养 将愈伤组织转移至光照培养，光强度为2000lux、12h/d，15～20d。 E.植株再生 将愈伤组织转接到分化培养基继续继代培养,