广州地区大前庭水管相关SLC26A4基因热点突变分子流行病学剖析.docVIP

广州地区大前庭水管相关SLC26A4基因热点突变分子流行病学剖析 　　摘要：目的 分析广州地区正常听力人群中SLC26A4基因热点突变IVS7-2AG和2168AG发生频率，初步探讨SLC26A4基因热点突变在广州地区人群中的携带率及进行分子诊断的意义。 　　方法 针对2013年1月至2013年9月来我院就诊的6437例正常听力人群均抽取外周静脉血并提取DNA，以博奥生物有限公司提供的晶芯?九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片）对SLC26A4基因对GJB2、SLC26A4、mtDNA12srRNA和GJB3四个耳聋相关基因的9个致聋突变位点进行检测，分析热点突变位点IVS7-2AG和2168AG的发生频率。 　　结果 在6437例受检者中，携带SLC26A4基因IVS7-2AG和2168AG突变的例数共计107例，总阳性检出率为1.66%。IVS7-2AG突变携带者98例，2168AG突变携带者9例。 　　结论 在6437例正常听力人群中，通过SLC26A4基因热点突变IVS7-2AG和2168AG检测发现广州地区人群该位点的突变携带率为1.66%，低于全国其它地区的所报道的数据。该调查有助于了解广州地区正常人群中与大前庭水管综合征密切相关的SLC26A4基因热点突变的携带情况，同时也对IVS7-2AG和2168AG突变检测阳性患者的婚配、生育具有一定的指导意义。 　　关键词：遗传性耳聋 SLC26A4基因 突变携带 　　耳聋是临床上最常见的遗传病之一，严重影响患者的社会交流和生活质量。资料表明，平均每1 000名新生儿中就有1名患有先天性耳聋，其中50%～70%可能与遗传因素相关，基因突变是引起遗传性耳聋的主要因素[1]。迄今，与NSHL相关的一些基因已被克隆，遗传性耳聋的病因学研究有了很大进展。随着基因芯片技术的逐渐成熟，耳聋相关基因芯片已经进入临床应用阶段，为临床耳聋基因的大批量筛查提供了可能条件。 　　SLC26A4 基因突变可以导致大前庭水管综合征，是引起感音神经性聋的常见遗传学病因，研究表明其占感音神经性耳聋患者数的1%～15%，现已明确其为常染色体隐性遗传性疾病[2-3]。目前广州地区尚未针对正常人群中SLC26A4基因突变进行过大规模的流行病学调查，因而该热点突变位点在正常人群中的携带率尚待研究。本研究以统一的策略和方法对来我院就诊的6437例正常听力人群进行耳聋基因筛查，并针对SLC26A4基因IVS7-2AG和2168AG突变携带进行统计分析，初步探讨SLC26A4基因热点突变在广州地区正常人群中的携带情况，为突变携带者提供分子诊断的同时对其婚配对向及后代的婚配生育提供遗传咨询和科学指导。 　　1、资料与方法 　　1.1 研究对象 　　针对2013年1月至2013年9月来我院就诊的6437例正常听力人群，其中女性4317人，男性2120人，平均年龄25±3岁。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 DNA的提取 　　用含枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管采集受检者3ml外周静脉血，应用Lab-aid820核酸提取试剂盒（厦门致善生物科技有限公司）提取DNA，用Thermo-nanodrop2000进行定量和纯度检测。满足浓度100-200ng/ul，纯度OD260/280=1.7-2.0。 　　1.2.2 主要试剂及仪器 　　晶芯九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法），PCR仪（ABI9700），芯片杂交仪（BioMixerⅡ），芯片洗干仪（SlideWasher TM8），芯片扫描仪（LuxScan TMDX24/B）购自博奥生物技术有限公司。 　　1.2.3 耳聋基因芯片检测 应用遗传性耳聋基因芯片检测试剂盒对GJB2、SLC26A4、mtDNA12srRNA和GJB3四个耳聋相关基因的9个致聋突变位点进行检测。这9个位点为：GJB基因的35delG，176del16，235delC，299delAT；SLC26A4基因的2168AG，IVS7-2AG；线粒体12SrRNA1494CT，1555AG；GJB3基因的538CT。检测过程主要分3个步骤：多重不对称等位基因特异性PCR，扩增产物跟芯片杂交，芯片结果的扫描和判读。具体步骤参照试剂盒说明书。 　　2 结果 　　在受检的6437例样本中，检测到携带SLC26A4基因IVS7-2AG和2168AG突变的例数共计107例，总阳性检出率为1.66%。IVS7-2AG突变携带者98例，2168AG突变携带者9例，检出率分别是1.52%和0.14%，以上数据表明广州地区SLC26A4基因热点突变检出率较全国其它地区存在一定差别。 　　3 讨论 　　作为大前庭水管发病密切相关基因，SLC26A4基因的突变携带率国内