海洋浮游硅藻的培育、活性成分分析与药理学的-研究.pdf

海洋浮游硅藻的培育、活性成分分析及 药理学研究 摘 要 海洋浮游硅藻 (Marine planktonic diatom ，MPD)是海洋微藻中的单细胞 浮游生态类群，其胞外、胞内物质如多糖 (Polysaccharide)和多不饱和脂肪 酸(Polyunsaturated fatty acids，PUFA)含量丰富，在海洋水产养殖和海洋生物 制药业中应用前景广阔。本文从海洋浮游硅藻(MPD)藻种的分离和保存开 始，对其优化规模培养、增产、采收，胞内和胞外物质的提取、分离、纯化、 成分分析与结构修饰、药理活性和应用等方面进行了研究，得出结论如下： 1. 海洋浮游硅藻藻种可采用稀释法和微挑法加以分离，且后者分离的目的 性、时效性更好。不同藻种的保存条件差异很大，在优化专业培养基中 接种比例为 1 ∶12(藻种密度为 3×105 cells/ml) ，经“双抗”和 GAF 保护， 新月菱形藻在 4 ℃和无光照条件下，保存良好；三角褐指藻则在 25 ℃ 和有光照条件下，易于保存。 2. 海洋浮游硅藻在优化专业培养基上可进行大规模培养。随着生长影响因 子(Growth affection factor，GAF)的加入，1000mg/L 的GAF 对新月菱形 藻 (Nitzschia closterium, NC) 、 800mg/L 的 GAF 对三角褐指藻 (Phaeodactylum tricornutum ，PT)增产、助长和防污效果显著；可采用低 速离心法和絮凝法采收成熟藻体，以低速离心法操作更为简便。把纯化、 促进培养目标藻的生长与抑制其他伴生杂藻生长相结合，增强海洋浮游 硅藻大规模培养的抗污染性和适应性，提高培养产出率，是本研究的创 新之处。 3. 将藻体采收完毕之后的离心上清液过滤、恒温浓缩、醇提、脱蛋白、去 色素、复溶、透析和冷冻干燥后得胞外物质粗品，经硫酸-蒽酮法定性 检测为多糖；再经 DEAE-C 柱层析分离，可知其胞外多糖为三种多糖 的混合物。采用柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)对纯品均一多糖进 I 行成分分析可知其中含有甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)、葡萄糖(Glu)和 半乳糖(Gal)等单糖组分。通过“血清药理学”等实验方法进行体内、体外 实验表明，胞外多糖在抗肿瘤细胞 S180 与 Hela 、抗流感病毒FM 和促 进血液淋巴细胞增值等方面效果良好，而且经氯磺酸-吡啶法硫酸酯化 结构修饰的胞外多糖药理活性显著提高。胞外多糖的药理学研究是海洋 浮游硅藻基础开发应用研究的全新领域。把海洋浮游硅藻作为传统的生 物饵料培养转向生物医药和保健品应用领域，是本研究又一新的探索。 4. 海洋浮游硅藻藻体经超声波破碎、氢氧化钾－甲醇溶液甲酯化、石油醚 萃取、低温浓缩，得胞内物质。气相色谱仪－质谱仪联用(GC-MS)检测 为多不饱和脂肪酸(PUFA) ，并富含多烯脂肪酸中的二十碳五烯酸 (Eicosapentaenoic acid，EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid， DHA) 。这为廉价、高效获取多不饱和脂肪酸生产原料开辟了新途径。 5. 人工培养条件下，海洋浮游硅藻繁殖快、生长周期短、生物量大，可作 为海洋生物制药新的原料来源。本研究为全面深入开发海洋浮游硅藻资 源提供了有效依据。 关键词： 海洋浮游硅藻；胞外多糖；多不饱和脂肪酸；组成与结构分析； 药理学活性；生物制药 II Studies on cultivation,analysis of active components and pharmacology of marine planktonic diatom