Bacillus.sp.bs-1的内切葡聚糖酶在大肠杆菌中的表达的-研究.pdfVIP

摘 要 纤维素是世界上最丰富的天然有机物，是一种廉价可再生资源，它的开 发和利用具有深远的意义。利用纤维素酶降解纤维素是一种有效而环保的途径， 而且纤维素酶的应用范围广。因此，对纤维素酶及其应用的研究逐渐成为了人们 关注的热点。目前，对内切葡聚糖酶的研究较多。 孙麟完成了一株纤维素酶活性比较高的枯草芽孢杆的菌筛选及分离，对其进 行了分子鉴定，并命名为Bacillus. Sp. bs-1，并成功克隆了其内切葡聚糖酶基因。 本研究在这基础上，构建不同原核表达载体，并在大肠杆菌中进行了可溶性过表 达的研究。本研究的目的是对表达载体进行比较，研究它们的表达效率，同时也 对表达条件进行优化，为内切葡聚糖酶的可溶性过表达研究打基础。 本研究成功的构建成了三个不同的表达载体，即 pQE-30-C 、pET-30a-C 、 pET-28a-C ，并对其表达效果进行了比较。通过摸索适合的表达条件，确定了 pET-30a-C 、pET-28a-C 表达的内切葡聚糖酶的最佳可溶性诱导表达条件。 pET-30a-C 表达的内切葡聚糖酶在25 ℃，用1mM 的IPTG 诱导3 小时就可以达 到最佳可溶性表达量。pET-28a-C 表达的内切葡聚糖酶在25 ℃，用0.