recent advances in microarray technologies for proteomics讲义教材.ppt

* Recent Advances in Microarray Technologiesfor Proteomics 生命科学 1201班 周宇筝 3702120110 Library Construction Microarray Immobilizationcule Microarray Application Challenges Library Construction Library Construction peptide microarray small molecule microarray protein microarray To identify a few biologically active compounds from the huge libraries of biomolecules is like searching for a needle in a haystack. Representative Examples of Small Molecules/Peptides Discovered from Screenings Using Small Molecule and Peptide Microarrays Microarray Immobilization 与核酸不同，蛋白质是高度复杂和精巧的分子， 任何导致其构象变化的步骤都将极大地影响其生物学功能。故蛋白质芯片技术中很关键的步骤是如何将蛋白质固定到基质上，并且不丧失生物学活性。 固相机制 凝胶、滤膜类 玻璃片及改良玻璃片 滤膜、凝胶类软基质容易吸附蛋白，且容易保持蛋白质维持活性所需要的水环境。滤膜对蛋白质的固定效果好，利用基质的通透性，将多张滤膜叠在一起，可一次点样得到多张芯片。 这些载体往往不能满足蛋白质机械点样强度高的要求!同时点在上面的样品易发生扩散导致不同样品之间相互干扰 玻璃片具有表面光滑，成本低，性能稳定等优点!已经被广泛应用于蛋白质芯片的制作。 固定在玻片上的蛋白质是方向各异的!因此有一部分蛋白质由于没有游离的反应域而在后继的过程中不能够与待测样品中的相应组分发生生物学反应 Microarray Immobilization Microarray Immobilization 蛋白质的固定方式 物理吸附 共价连接 利用碱基配对 物理吸附是蛋白质固定中最简单的方式，主要作用力是难于控制的疏水作用力、离子键和氢键。在溶液里，吸附表面有可能跟溶液交换所吸附的蛋白质分子，强烈的冲刷也会使吸附了的蛋白质解离下来。吸附在疏水表面，吸附作用力太强，或蛋白质和固相基质间作用位点过多，都可能导致蛋白的变性。蛋白质的吸附位点和活性部位间太近会不利于配体的结合。总体上说，物理吸附对蛋白质的活性保持有一定优势。 共价连接是普遍采用的通过化学键连接的方式。对探针分子进行化学修饰，使之能与固相基质上相应的活化位点通过共价键直接或间接连接起来。共价连接的方式作用位点少，但作用力强，固定牢固，整体反应也较为容易控制。如果知道蛋白质分子的三级结构，就可能实现定点修饰，使其生物活性部位向外，达到一种“定向”的效果，提高灵敏度。使用重组蛋白技术，或使用特定低聚物修饰的表面都能够实现这一效果。 碱基配对是将核酸片段固定在芯片上，固定结合了互补核酸的蛋白质。这种借助基因芯片实现蛋白质芯片的技术综合了两者的优势，非常有利于芯片上蛋白质分子的定向。蛋白质的固定准确，活性高，容易定量控制，整张芯片表现出较好的均一性。 *