RNA干扰靶向抑制胃癌SG7901细胞2基因和蛋白表达的研究　.docVIP

RNA干扰靶向抑制胃癌SGC7901细胞C0X2基因和蛋白表达的研宄 ：李玉明蒋宏吴峰阶于兴泉宋丙潭刘春远 】目的利用RNAi技术，以胃癌SGC7901细胞 C0X?2作为靶点，建立有效的RNA干扰方法，为胃癌及其复 发和转移提供基因治疗的新方法。方法设计并合成6条 C0X?2siRNA和1条阴性对照siRNA,用3种不同的转染试 剂分别转染胃癌SGC7901细胞，荧光定量PCR和 Westernblotti ng检测胃癌SGC7 9 01细胞中C0X?2基因和 蛋白的表达。结果T OPtranf ecti on能够有效介导报告基 因DNA (pcDNA/lacZ )转染SGC7 901细胞，细胞转染率为%， 明显优于其它两种转染试剂，转染的pcD NA/lacZ?siR NA 对报告基因产生显著抑制;TOPtran f ection介导的CO X?2siRNA有效抑制了胃癌细胞C 0X?2 mRNA表达，与对照组 相比抑制效率达90%以上，最高达％，同时抑制胃癌S GC7901细胞⑶X?2蛋白表达%。结论TOPtranfe ction能够 有效介导C0X?2siRNA转染SGC7901细胞；靶向C0X?2的R NA干扰能有效抑制胃癌细胞中C0X?2基因和蛋白的表达， 为胃癌的治疗以及抑制胃癌复发和转移提供基因治疗新的 靶点和方法。 关键词】RNA干扰；环氧酶?2;胃癌?’基因治疗 L Ab stract ] Obj e ctiveToes ta blishane ffi cientme thod ofRNAi nterf erenc eonCOX ?2of gastric can cercelll in eSGC7901, a ndprovidea newpathwayf orgenethera pyofgastri c cancerand it srecurre nee andSixp iece sofCOX ?2sma Hint erf ere nceR NA (siRN A) a ndoneneg at ivecontro 1 siRNAwered esignedands ynthesizedc hemically, g astriccan ce rcelllin eSG C7901we retr ansfec tedwi ththe mmedia tedb ythreed iff erenttra ns fectionre a gent. COX?2 mRNAandCOX? 2proteinofg astriccanc e rcellline SG C7901wer ech eckedwi thre altime quant itati vePCRa ndWe sternbl ott ingmetho ds Transfect i onofgastri ccancercell lineSGC7901 withreport g eneDNA (pc DN A/lacZ) c oul dbemedi ated byTOPt ranfe ction rateof gast riccanc ere elllineS GC 7901was%, c otransfect ionofgastri ccancercell lineSGC790 1 withDNA (p cD NA/lacZ) and pcDNA/1 acZ?siRNAc ouldb emedi atedby TOPt ranfect ion efficien tl y, siRNAbr o ughtaboutd istinguishe dinhibition efficiency o nDNA (pcDN A/lacZ) . Co mpa redtone gati vecont rol, C 0X?2m RNAing astr iccance rce lllineSG C7 901measur e dbyrealtim equantitati vePCRaftert ransfectio n withC0X?2 (0 ?5)siRNA sme diatedb yTOP tranfe ction wered egrade dsig nifican tly ，C0X?2si RN Aresulted i nhighesttr ansfectione fficiency%, otherswere a bove90%.P ro teinexpr ess ionofCO X?2i nSGC79 Olcel lline measur edby Western bio ttingwas lo wer%after t ransfected withC0X?2Tr ansf