PT、顺铂对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡作用的体外研究.docVIP

PDTC、顺钻对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡作用的体 外研究 研究生：代金灿 导师：张本斯 教授 中文 目的：研宂毗咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）、顺铂（DDP）对非小细胞肺 癌A549细胞增殖及凋亡的作用，以及与Bcl-2、Bax及NF-kB表达的关系 方法:MTT法测试PDTC、DDP及PDTC联合DDP对非小细胞肺癌A549 细胞的细胞毒性并观察是否存在剂量和时间依赖性；不同药物浓度作用48h后， 倒置显微镜下直接观察各组给药后细胞形态学的变化，HE染色后光学显微镜下 观察各组给药后细胞形态学的变化；免疫组化法观察PDTC及PDTC+DDP对非 小细胞肺癌A549细胞巾凋亡蛋白NF-kBp56、Bax以及Bcl-2的表达变化情况。 结果：1. PDTC、DDP及PDTC联合DDP对A549细胞增殖的影响：（1）. 不同药物浓度的PDTC, DDP及PDTC+DDP对A549细胞增殖都有抑制作用， 并随着时间延长及浓度的升高，增殖抑制率分别从3.12%增加到36.18%，从 3.54%增加到39.91%,及从12.19%增长到63.3%,存在时间及浓度依赖关系；而 且各药物作用组分别与对照组相比，对A549细胞生长抑制作用的差异都有统计 学意义（P0. 05）。（2）作用48h吋，药物组PDTC、DDP及PDTC+DDP对 A549 细胞的增殖抑制率分别为 8.89%、16.41%、19.58%、30.64%, 5.3%、14.74%、 24.39%、39.51 和 13.33%、25.13%、39.85%、58.5%,前二组与 PDTC+DDP 组 间的差异都有统计学意义（P0. 05），Q值人于1.15,表示PDTC+DDP联合作 用于A549细胞有协同作用。 PDTC、PDTC联合DDP对A549细胞凋亡的影响：不同药物浓度（PDTC、 PDTC+DDP）作用细胞48小时后，倒置显微镜下见：A549细胞随药物浓度的增 高，细胞密度降低，贴壁能力变差，部分细胞变圆、皱缩并漂浮于培养液屮；经 HE染色后光学显微镜下可见:A549细胞随药物浓度的增高，细胞存留密度降低， 细胞形态改变，核浆比重减小，出现细胞皱缩，核膜裂解，染色质浓缩，最终出 现凋亡细胞。 PDTC、PDTC联合DDP对A549细胞免疫组化蛋白的表达：PDTC、PDTC 联合DDP下不同浓度随着浓度的增加，NF-kBp65蛋白表达减少，抗凋亡蛋白 Bal-2表达减少，促凋亡蛋白Bax表达增强。 结论：l.PDTC、DDP及PDTC联合DDP对A549细胞牛.长有抑制作用，并促进 其凋亡，呈时间-剂量依赖关系； PDTC与DDP联合可协同作用于A549细胞，抑制细胞的增殖并促进细胞的 凋亡； 进一步证实，PDTC能通过NF-kBP65抑制蛋白，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2蛋 白表达，从而促进细胞凋亡过程，PDTC可促进DDP化疗效果 关键词：PDTC； DDP；人肺腺癌A549;增殖；凋亡 0前全球范围内新发肺癌患者每年己经超过150万左右的病例，也是我国男 性发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。肺癌的主要病理类型包括非小细胞肺癌和小 细胞肺癌两大类，非小细胞肺癌包括鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌 相比，其癌细胞生长分化较慢，扩散转移较晚，人多数患者确诊已为晚期，约占 肺癌总数的80%-85%m，手术治疗效果及预后都比较差，因此化疗为主要治疗方 法，但是化疗也受到多方而因素的的影响，造成化疗效果并不理想，随着肿瘤细 胞生物学的研究，信号通道抑制剂联合化疗登上恶性肿瘤综合治疗的舞台，成为 研宄热点之一。 顺粕(cisplatin，DDP)全称为顺氯氨铂，是1965年由美国科学家B.Rosenborg 等人首次发现的，第一个具有抗癌活性的金属配合物。他发现“惰性的怕电极” 可引发细菌的菌丝生长，并由此推测出了顺式二氯二钔的抗癌特性。顺铂为一线 广谱抗癌药物，一直是治疗非小细胞肺癌的主要药物，然后随着铂类为主化疗药 物的广泛应用，部分化疗患者化疗因耐药而导致化疗失败，Yoon%等发现，在 耐顺钔人肺腺癌细胞H460/CIS中，Bcl-2表达水平显著增高，提示Bcl-2可能与 顺铂耐药有关。然而，在耐顺铂SCLC细胞H69/CP中,Bcl-xl和Bax表达均增 高，而Bcl-2表达反而下降，而且顺铂对Bcl-2磷酸化几乎无影响［3］,因此H69 对顺铂获得性耐药形成与Bcl-2表达或其磷酸化水平升高无关，这显然和Bcl-2 参与肺癌顺铂耐药观点不相符。 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)是一种可以通透细胞膜的NF-kB活化抑 制剂，可以在多种细胞中抑制NF-kB的激活。NF-kB是近年来较只研宄潜力的 调节凋亡、免疫反应、应激反应和炎症的核转录因子，它可以调控