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人促红细胞生成素在CHO细胞上的表达 魏霄雲哈尔滨师范大学生命科学与技术学院生物制药 促红细胞生成素的理化性质 EPO是由165个氨基酸组成的高糖基化蛋白质，去唾液酸或去糖基化不影响重组人EPO的体外生物活性，但却缩短了在体内的半衰期，使其完全丧失了在体内的活性，说明糖基对其生物活性是至关重要的，因此基因工程的EPO不能利用原核表达系统，只能利用哺乳动物细胞表达系统（如CHO细胞）生产 关于EPO 人促红细胞生成素是一种由肾脏产生的高度糖基化蛋白,是红系细胞发育过程中最重要的调节因子。天然存在的EPO药源极为匮乏,须从贫血病人尿中提取,不能满足社会的需要。1985年Jacob等成功地从胎儿肝中克隆出EPO基因,使通过基因工程手段大量生产重组EPO成为可能。 关于EPO 国外用人促红细胞生成素gDNA(genomic DNA)在哺乳动物细胞中已获得高效表达,而在我国虽也有重组产品问世,但存在表达水平偏低,生产成本偏高的问题,不能满足大规模工厂化生产和临床应用的需要,因此迫切需要提高EPO在细胞中的表达量。 为此,我们开展了EPO在CHO细胞中的表达研究,希望能获得比较理想的效果。 实验目的： 获得人促红细胞生成素(EPO)的高效表达 三、实验仪器及耗材 实验试剂与器材 氨甲喋呤(MTX)、煌焦